.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: 465,54 KU-0063794 - мощный и высокоспецифичный двойной ингибитор mTOR mTORC1 и mTORC2 с IC50 ~ 10 нМ; не влияет на PI3K. \ n По сравнению с ингибитором mTOR PP242, KU-0063794 проявляет более высокую специфичность в отношении mTOR, поскольку он неактивен в отношении PI3K или 76 других киназ. В клетках HEK-293 30 нМ KU-0063794 достаточно для быстрого снижения активности S6K1 путем блокирования фосфорилирования гидрофобного мотива (Thr389) и последующего фосфорилирования остатка Т-петли (Thr229). В случае стимуляции IGF1 клеток HEK-293, лишенных сыворотки, необходимо 300 нМ KU-0063794 для подавления активности S6K1 на ~ 90%. KU-0063794 в концентрации 100-300 нМ также полностью ингибирует индуцированное аминокислотами фосфорилирование белка S6K1 и S6. Подобно S6K1, KU-0063794 ингибирует фосфорилирование mTORC1 по Ser2448 и mTORC2 по Ser2481 в зависимости от дозы и времени. В присутствии сыворотки или после стимуляции IGF1 KU-0063794 индуцирует дозозависимое ингибирование активности и фосфорилирования Akt по Ser473 и неожиданному Thr308, а также фосфорилирование субстратов Akt PRAS40 по Thr246, GSK3α / GSK3β по Ser21 / Ser9 и Foxo-1 / 3a в Thr24 / Thr32. KU-0063794, но не рапамицин, ингибирует активность SGK1 и фосфорилирование Ser422, а также его физиологический субстрат NDGR1 дозозависимым образом в той же степени, что и фосфорилирование S6K1 и Akt, тогда как доза KU-0063794 не ингибирует фосфорилирование ERK или RSK, индуцированное сложным эфиром форбола. и активация RSK. По сравнению с рапамицином, KU-0063794 проявляет более значительную способность вызывать полное дефосфорилирование 4E-BP1 по Thr37, Thr46 и Ser65. KU-0063794 подавляет рост клеток MEF как дикого типа, так и с дефицитом mLST8 и индуцирует остановку клеточного цикла G1 в большей степени, чем рапамицин. \ п
|
mTOR complexes kinase assays
|
HEK-293 cells are freshly lysed in Hepes lysis buffer. Lysate (1-4 mg) is pre-cleared by incubating with 5-20 μL of Protein G-Sepharose conjugated to pre-immune IgG. The lysate extracts are then incubated with 5-20 μL of Protein G-Sepharose conjugated to 5-20 μg of either anti-Rictor or anti-Raptor antibody, or pre-immune IgG. All antibodies are covalently conjugated to Protein G-Sepharose. Immunoprecipitations are carried out for 1 hour at 4 °C on a vibrating platform. The immunoprecipitates are washed four times with Hepes lysis buffer, followed by two washes with Hepes kinase buffer. For Raptor immunoprecipitates used for phosphorylating S6K1, for the initial two wash steps the buffer includes 0.5 M NaCl to ensure optimal kinase activity. GST-Akt1 is isolated from serum-deprived HEK-293 cells incubated with PI-103 (1 μM for 1 hour). GST-S6K1 is purified from serum-deprived HEK-293 cells incubated with rapamycin (0.1 μM for 1 hour). mTOR reactions are initiated by adding 0.1 mM ATP and 10 mM MgCl2 in the presence of various concentrations of KU-0063794 and GST-Akt1 (0.5 μg) or GST-S6K1 (0.5 μg). Reaction are carried out for 30 minutes at 30 °C on a vibrating platform and stopped by addition of SDS sample buffer. Reaction mixtures are then filtered through a 0.22-μm-poresize Spin-X filter and samples are subjected to electrophoresis and immunoblot analysis with the indicated antibodies.
|
Клеточный анализ: [1]
|
Cell lines
|
Wild-type and mLST8 deficient MEFs
|
|
Concentrations
|
Dissolved in DMSO, final concentration ~3 μM
|
|
Incubation Time
|
24, 48, and 72 hours
|
|
Method
|
Cells are treated with KU-0063794 for 24, 48, and 72 hours, and the medium is changed every 24 hours with freshly dissolved KU-0063794. For the measurement of cell growth, cells are washed once with PBS, and fixed in 4% (v/v) paraformaldehyde in PBS for 15 minutes. After washing once with water, the cells are stained with 0.1% Crystal Violet in 10% ethanol for 20 minutes and washed three times with water. Crystal Violet is extracted from cells with 0.5 mL of 10% (v/v) ethanoic (acetic) acid for 20 minutes. The eluate is then diluted 1:10 in water and absorbance at 590 nm is quantified. For the assessment of cell cycle distribution, cells are harvested by trypsinization, washed once in PBS, and re-suspended in ice-cold aq. 70% (v/v) ethanol. Cells are washed twice in PBS plus 1% (w/v) BSA and stained for 20 minutes in PBS plus 0.1% (v/v) Triton X-100 containing 50 g/mL propidium iodide and 50 g/mL RNase A. The DNA content of cells is determined using a FACSCalibur flow cytometer and CellQuest software. Red fluorescence (585 nm) is acquired on a linear scale, and pulse width analysis is used to exclude doublets. Cell-cycle distribution is determined using FlowJo software.
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
\ n Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
465.54
|
|
Formula
|
C25H31N5O4
|
|
CAS No.
|
938440-64-3
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
16 mg/mL
(34.36 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
<1 mg/mL
(
|
|
In vivo
|
30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol
|
30 mg/mL
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
(5-(2-((2R,6S)-2,6-dimethylmorpholino)-4-morpholinopyrido[2,3-d]pyrimidin-7-yl)-2-methoxyphenyl)methanol
|
Калькулятор молярности Калькулятор разведения Калькулятор молекулярной массы
Группа Продуктов : PI3K / Akt / mTOR > mTOR ингибитор
