.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 396,49 Динациклиб (SCH727965) - новый и мощный ингибитор CDK для CDK2, CDK5, CDK1 и CDK9 с IC50 1 нМ, 1 нМ, 3 нМ и 4 нМ, соответственно. Он также блокирует включение ДНК тимидина (dThd). Фаза 3. \ n Биологическая активность Динациклиб также является мощным ингибитором репликации ДНК, который блокирует включение ДНК тимидина (dThd) в клетки A2780 с IC50 4 нМ. Динациклиб сильно подавляет фосфорилирование Rb на Ser 807/811 при концентрациях> 6,25 нМ, что согласуется с наблюдением, что для 50% ингибирования включения dThd ДНК в той же клеточной модели требуются концентрации 4 нМ. Важно отметить, что полное подавление фосфорилирования Rb коррелирует с началом апоптоза, на что указывает появление продукта расщепления p85 PARP в клетках, подвергшихся воздействию> 6,25 нМ динациклиба. Динациклиб активен против широкого спектра линий опухолевых клеток человека. Добавление динациклиба во время воздействия гидроксимочевины также подавляет накопление γ-H2AX в зависимости от дозы. Динациклиб подавляет пролиферацию клеток меланомы и приводит клетки меланомы к массивному апоптозу. Динациклиб вызывает апоптоз ряда клеточных линий остеосаркомы, включая те, которые устойчивы к доксорубицину и дазатинибу. Динациклиб ослабляет фосфорилирование РНКП II по серину 2 и фосфорилирование ингибитора CDK p27Kip1 по треонину 187. Снижение активности фосфорилирования происходит через 12-40 нМ динациклиба (через 4-16 часов после добавления динациклиба). Динациклиб также снижает фосфорилирование Rb по серину 807/811. Динациклиб в одинаковой степени индуцирует апоптоз ложных и истощенных по p53 клеток U2OS. Введение динациклиба внутрибрюшинно в дозах 8, 16, 32 и 48 мг / кг ежедневно в течение 10 дней приводит к ингибированию опухоли на 70%, 70%, 89% и 96% соответственно. Динациклиб MED (минимальная эффективная доза), по-видимому, представляет собой протокол (только для справки) киназного анализа: [1]
|
Cyclin/CDK kinase assay
|
Recombinant cyclin/CDK holoenzymes are purified from Sf9 cells engineered to produce baculoviruses that express a specific cyclin or CDK. Cyclin/CDK complexes are typically diluted to a final concentration of 50 μg/mL in a kinase reaction buffer containing 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, and 0.1 mM sodium orthovanadate. For each kinase reaction, 1 μg of enzyme and 20 μL of a 2-μM substrate solution (a biotinylated peptide derived from histone H1) are mixed and combined with 10 μL of diluted Dinaciclib. The reaction is started by the addition of 50 μL of 2 μM ATP and 0.1 μCi of 33P-ATP. Kinase reactions are incubated for 1 hour at room temperature and are stopped by the addition of 0.1% Triton X-100, 1 mM ATP, 5 mM EDTA, and 5 mg/mL streptavidin-coated SPA beads. SPA beads are captured using a 96-well GF/B filter plate and a Filtermate universal harvester. Beads are washed twice with 2 M NaCl and twice with 2 M NaCl containing 1% phosphoric acid. The signal is then assayed using a TopCount 96-well liquid scintillation counter.
|
Клеточный анализ: [1]
|
Cell lines
|
A2780 cells
|
|
Concentrations
|
0 μM -5 μM
|
|
Incubation Time
|
24 hours
|
|
Method
|
A2780 cells are maintained in DMEM plus 10% fetal bovine serum and passaged twice weekly by detaching the monolayer with trypsin-EDTA. One hundred microliters of A2780 cells (5 × 103 cells) are added per well to a 96-well Cytostar-T plate and incubated for 16 hours to 24 hours at 37 °C. Dinaciclib is serially diluted in complete media plus 2% 14C-labeled dThd. Media are removed from the Cytostar T plate; 200 μL of various Dinaciclib dilutions are added in quadruplicate; and the cells are incubated for 24 hours at 37 °C. Accumulated incorporation of radiolabel is assayed using scintillation proximity and measured on a TopCounTM.
|
\ n Преобразование различных модельных животных на основе BSA (значение основано на данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
396.49
|
|
Formula
|
C21H28N6O2
|
|
CAS No.
|
779353-01-4
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
26 mg/mL
heating
(65.57 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
8 mg/mL
heating
(20.17 mM)
|
|
In vivo
|
15% Captisol
|
6 mg/mL
|
|
|
Chemical Name
|
(2S)-1-[3-ethyl-7-[[(1-oxido-3-pyridinyl)methyl]amino]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl]-2-piperidineethanol
|
|
Stock Solution (1ml DMSO)
|
1mM
|
10mM
|
20mM
|
30mM
|
|
Mass(mg)
|
0.39649
|
3.9649
|
7.9298
|
11.8947
|
Группа Продуктов : Клеточный цикл > CDK ингибитор
