AT9283 896466-04-9

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 381,43 AT9283 - мощный ингибитор JAK2 / 3 с IC50 1,2 нМ / 1,1 нМ; также эффективен для Aurora A / B, Abl (T315I). Фаза 2. \ n Биологическая активность AT9283 приводит к четкому полиплоидному фенотипу за счет ингибирования активности киназы Aurora B в клетках HCT116 с IC50 30 нМ. Кроме того, AT9283 также оказывает сильное ингибирование образования колоний HCT116. У мышей, несущих ксенотрансплантат карциномы толстой кишки человека HCT116, обработка AT9283 (15 мг / кг и 20 мг / кг) в течение 16 дней приводит к значительному ингибированию роста опухоли на 67% и 76% соответственно. Кроме того, AT9283 также демонстрирует значительно более длительный период полувыведения в опухолях (2,5 часа) по сравнению с плазмой (0,5 часа) и умеренную пероральную биодоступность у мышей (Fp.o. = 24%). Анализы киназ Aurora A и Aurora B Анализы Aurora A и B выполняются в формате DELFIA. Фермент Aurora A инкубируют с AT9283 и 3 мкМ субстрата поперечного отлива (биотин-CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG) в 10 мМ MOPS, pH 7, 0,1 мг / мл BSA, 0,001% Brij-35, 0,5% глицерина, 0,2 мМ EDTA, 10 мМ MgCl2. , 0,01% β-меркаптоэтанола, 15 мкМ АТФ и 2,5% ДМСО. Фермент Aurora B инкубируют с AT9283, 3 мкМ указанного выше субстрата в 25 мМ Трис, pH 8,5, 5 мМ MgCl2, 0,1 мг / мл БСА, 0,025% Твина-20, 1 мМ DTT, 15 мкМ АТФ и 2,5% ДМСО. . Реакции позволяют продолжаться в течение 60 минут и 45-90 минут для Aurora A и Aurora B, соответственно, перед гашением EDTA. Затем реакционные смеси переносят на планшет, покрытый нейтравидином, и фосфорилированный пептид количественно определяют с помощью фосфо-специфического антитела и меченного европием вторичного антитела с использованием флуоресценции с временным разрешением (возбуждение, 337 нм; испускание, 620 нм). Значения IC50 для контрольных соединений составляют 92 нМ (анализ Aurora A) и 17 нМ (Aurora B). \ n Метод \ n Клетки HCT 116 культивируют в среде DMEM + 10% FBS + GLUTAMAX I. Черные 96-луночные плоскодонные (прозрачные) планшеты, обработанные культурой ткани, засевают в 200 мкл среды и инкубируют в течение приблизительно 16 часов при 37 °. C во влажной атмосфере с 5% CO2 в воздухе. Клетки обрабатывают тестируемым соединением в девяти различных концентрациях (от 1 нМ до 10 мкМ, плюс контроль носителя ДМСО), а затем инкубируют в течение 72 часов. Затем отмечают морфологические наблюдения полиплоидии клеток. Сообщается о концентрации AT9283, необходимой для получения отчетливого полиплоидного фенотипа. Клетки высевают при концентрации 75-100 клеток / мл соответствующей культуральной среды на 6- или 24-луночные планшеты для тканевых культур и дают возможность восстановиться в течение 16 часов. Тестируемое соединение (11 концентраций от 0,1 нМ до 10 мкМ) или контрольный носитель (ДМСО) добавляют в дублированные лунки, чтобы получить конечную концентрацию ДМСО 0,1%. После добавления соединения колониям дают возможность расти от 10 до 14 дней для оптимального дискретного подсчета колоний. Колонии фиксируют в 2 мл фиксатора Карнуа (25% уксусная кислота, 75% МеОН) и окрашивают в 2 мл 0,4% масс. / Об. Кристаллического фиолетового. Подсчитывают количество колоний в каждой лунке. Значения IC50 рассчитывают по сигмоидальным кривым зависимости IC50 от дозы (переменный наклон) с использованием программного обеспечения Prism Graphpad. \ п

Группа Продуктов : Эпигенетика > Ингибитор JAK