АЗ 960 905586-69-8

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Биологическая активность AZ960 также ингибирует многие киназы менее чем на 50% в концентрации 0,1 мкМ, такие как JAK3 (IC50 = 9 нМ), TrkA, Aurora и ARK5. В клетках AZ 960 ингибирует фосфорилирование STAT5 в клетках TEL-JAK2 со средней IC50 15 нМ и проявляет 15-30-кратную чувствительность к фосфорилированию STAT5, управляемому TEL-JAK2, по сравнению с клеточными линиями, управляемыми другими членами семейства киназ JAK ( TEL-JAK1, -JAK3 и -TYK2). AZ 960 демонстрирует сильную активность в ингибировании пролиферации клеточных линий TEL-JAK2, -JAK1, -JAK3 и -Tyk2 со значениями GI50 25 нМ, 230 нМ, 279 нМ и 214 нМ соответственно. Более того, AZ 960 также эффективно ингибирует пролиферацию клеток SET-2 со средним GI50 33 нМ, снижая уровни фосфорилирования как STAT3, так и STAT5. AZ 960 вызывает остановку роста и апоптоз Т-клеточного лимфотропного вируса человека типа 1, HTLV-1pe 1, HTLV-1LV-1, пролиферацию клеток T-cSET-2 человека с Bcl-xL за счет малой интерферирующей РНК, усиливает антипролиферативные эффекты AZ. 960 в ячейках МТ-1. Недавнее исследование показывает, что AZ 960 приводит к значительному подавлению клоногенного роста и индукции апоптоза свежеизолированных клеток AML от пациентов. \ n Ферментный биохимический анализ и изучение ингибирования профиля киназ AZ 960 проводят с использованием рекомбинантной киназы JAK2 (аминокислоты 808–1132) при концентрации пептида (пептид Tyk2) 100 нМ и концентрации АТФ 15 мкМ. Используются концентрации AZ 960 от 0,003 мкМ до 30 мкМ. Режим ингибирования и константа ингибирования (Ki) AZ960 против киназы JAK2 дополнительно оценивают по кинетике ингибирования. В частности, серия реакций, катализируемых JAK2, запускается в буфере HEPES (75 мМ, pH 7,3) с фиксированной концентрацией пептида (FL-Ahx-IPTSPITTTYFFFKKK-COOH) и различными концентрациями АТФ и AZ 960. Прогресс каждая реакция впоследствии контролируется системой Caliper LC3000, и начальная скорость каждой реакции извлекается из соответствующего графика времени реакции. Для определения режима ингибирования начальные скорости наносятся на график против соответствующих концентраций АТФ с использованием графиков Лайнуивера-Берка, а характерное схождение линий на оси y демонстрирует конкурентоспособность AZ 960 по отношению к АТФ. Первоначальная проверка Ki с использованием уравнения Michealis-Menten показала, что AZ960 является ингибитором сильного связывания JAK2. AZ960 настроен против 83 киназ при трех концентрациях ингибитора (0,01 мкМ, 0,10 мкМ и 1,0 мкМ). Метод Клеточная пролиферация оценивается с помощью флуорометрического / колориметрического анализа BIOSOURCE AlamarBlue и считывается на считывающем устройстве для микропланшетов Spectra Max Gemini EM. Клетки SET-2 высевают по 20000 клеток / лунку, клетки TEL-JAK2 Ba / F3 - по 2000 клеток / лунку, а все другие TEL-JAK - по 5000 клеток / лунку в 96-луночные планшеты. Клетки обрабатывают AZ 960 через 24 часа после посева и выращивают в течение 72 часов для SET-2 и 48 часов для клеток TEL-JAK Ba / F3. После указанного периода роста добавляют Alamar Blue (10 мкл / лунку), клетки инкубируют при 37 ° C в 5% CO2 в течение 2 часов и измеряют флуоресценцию при 545 (возбуждение) и 600 нм (эмиссия). Данные нормализованы до процента от контроля, а значения GI50 (концентрация, вызывающая 50% -ное ингибирование роста) рассчитаны с использованием Xlfit4 версии 4.2.2 для Microsoft Excel.

Группа Продуктов : Эпигенетика > Ингибитор JAK