.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 213,24 PHA-767491 - мощный АТФ-конкурентный двойной ингибитор Cdc7 / CDK9 с IC50 10 нМ и 34 нМ соответственно. Он демонстрирует ~ 20-кратную селективность против CDK1 / 2 и GSK3-β, 50-кратная селективность против MK2 и CDK5, 100-кратная селективность против PLK1 и CHK2. \ N Биологическая активность PHA-767491 демонстрирует примерно 20-кратную селективность в отношении Cdk1, Cdk2 и GSK3-β, 50-кратную селективность для MK2 и Cdk5 и 100-кратная селективность для PLK1 и CHK2. PHA-767491 ингибирует пролиферацию клеток в различных линиях клеток человека с IC50 от 0,86 мкМ для SF-268 до 5,87 мкМ для K562 и значительно индуцирует апоптоз независимо от р53 почти во всех клеточных линиях в отличие от 5-FU или гемцитабин, который работает только в некоторых клеточных линиях. В отличие от современных ингибиторов синтеза ДНК, обработка PHA-767491 в дозе 5 мкМ блокирует начало репликации ДНК, но не развитие репликационной вилки, из-за специфического ингибирования киназы Cdc7 и фосфорилирования Mcm2 в Cdc7-зависимом сайте Ser40. Повышенная регуляция уровней Mcl-1 в ABT-737-устойчивых клетках OCI-LY1 и SU-DHL-4 может быть значительно снижена обработкой PHA-767491 в концентрации 3 мкМ, возможно, из-за ингибирования Cdk9, что приводит к восстановлению чувствительность к ABT-737. Прямой митохондриально-зависимый проапоптозный эффект PHA-767491 также наблюдается при применении в дозе 1 мкМ в покоящихся клетках хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL) по аналогичному механизму с EC50 0,34-0,97 мкМ. В то время как в пролиферирующих клетках CLL, стимулированных CD154 и интерлейкином-4, обработка PHA-767491 в концентрации 5 мкМ отменяет синтез ДНК, ингибируя Cdc7, а не запускает гибель клеток. Введение PHA-767491 два раза в день в течение 5 дней значительно ингибирует рост ксенотрансплантата HL60 дозозависимым образом с TGI 50% и 92% в дозе 20 мг / кг и 30 мг / кг, соответственно, эффект который также отмечен в моделях ксенотрансплантатов A2780, Mx-1 и HCT-116, а также в DMBA-индуцированных карциномах молочной железы и коррелирует с ингибированием Cdc7 и последующим снижением фосфорилирования Mcm2 в Cdc7-зависимом сайте Ser40. Протокол (только для справки ) Анализ киназы: [1]
|
In vitro kinase assays
|
The inhibition of Cdc7 and Cdk9 by PHA-767491 (IC50) is determined using the strong anion exchanger (Dowex 1-X8 resin, formate form)-based assay. For each enzyme, the absolute Km values for ATP and the specific substrate are initially determined, and each assay is then run at optimized ATP/33P-γ-ATP mix (2Km) and substrate (5Km) concentrations. Cdc7 kinase assay is performed in a buffer containing 50 mM Hepes pH 7.9, 15 mM MgCl2, 2 mM β- glycerylphosphate, 0.2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP mix, 5Km Mcm2 (aa 10-294), 37 nM of recombinant Cdc7/Dbf4 and increasing concentration of PHA-767491 in a final volume of 30 μL, and incubated for 1 hour at 25 °C. Cdk9 kinase assay is performed using 50 nM of recombinant Cdk9/cyclin T in 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP mix, 5Km RNA polymerase CDT peptide and increasing concentration of PHA-767491 in a final volume of 30 μL, and incubated for 1 hour at 25 °C. After incubation, an amount of 150 μL of resin/formate (pH 3.0) is added to stop the reaction and capture unreacted 33P-γ-ATP, separating it from the phosphorylated substrate in solution. After 1 hour of rest, a volume of 50 μL supernatant is transferred to Optiplate 96-well plates. After the additon of 150 μL of Microscint 40, the radioactivity is counted in the TopCount.
|
Клеточный анализ: [1]
|
Cell lines
|
HeLa, MCF7, HCT-116, U2OS, A2780, K562, SF-539, SF-268, Ovcar8, SW480, COLO205, HCT-15, Jurkat, PC3, and NHDF
|
|
Concentrations
|
Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 20 μM
|
|
Incubation Time
|
24 or 72 hours
|
|
Method
|
Cells are exposed to PHA-767491 for 24 or 72 hours. Cells are lysed and the ATP content in the well, used as a measure of viable cells, is determined using a thermostable firefly luciferase–based assay. Activation of caspase-3 and caspase-7 is measured as a ratio between treated sample and untreated control with a luciferase-based assay, containing a specific proluminescent substrate. DNA replication is measured as incorporation of nucleotide analog BrdU into DNA by flow cytometry.
|
Исследование на животных: [1]
|
Animal Models
|
Female SCID mice subcutaneously implanted with HL60 cells, male Hsd, athymic nu-nu mice subcutaneously implanted with HCT116 cells, A2780 or Mx-1 cells, and female Sprague-Dawley rats with DMBA-induced mammary carcinomas
|
|
Formulation
|
Dissolved in DMSO, and diluted in saline
|
|
Dosages
|
~50 mg/kg
|
|
Administration
|
Intravenous or oral administration twice a day
|
|
Solubility
|
1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80,
30 mg/mL
|
|
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
213.24
|
|
Formula
|
C12H11N3O
|
|
CAS No.
|
845714-00-3
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
CAY10572
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
24 mg/mL
(112.54 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
<1 mg/mL
(
|
|
In vivo
|
1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80
|
30 mg/mL
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
2-(pyridin-4-yl)-6,7-dihydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-4(5H)-one
|
Калькулятор молярности Калькулятор разведения Калькулятор молекулярной массы
Группа Продуктов : Клеточный цикл > CDK ингибитор
