.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 460,57 Милциклиб (PHA-848125) - мощный АТФ-конкурентный ингибитор CDK для CDK2 с IC50 45 нМ. Он более чем в 3 раза более селективен в отношении CDK2, чем CDK1, 2, 4, 5 и 7. Фаза 2. \ n Биологическая активность PHA-848125 подавляет, хотя и с меньшей эффективностью, активности циклина H / CDK7, циклина D1 / CDK4, p35 / CDK5, а также циклин E / CDK2 и циклин B / CDK1 со значениями IC50 0,15, 0,16, 0,265, 0,363, 0,398 мкМ соответственно. Киназа рецептора тропомиозина A также ингибируется PHA-848125 в том же наномолярном диапазоне, что и CDK. В наиболее чувствительной к PHA-848125 клеточной линии PHA-848125 вызывает зависимую от концентрации задержку G (1). PHA-848125 также нарушает фосфорилирование белка ретинобластомы в специфичных для CDK2 и CDK4 сайтах, снижает уровни белка ретинобластомы и циклина A и увеличивает экспрессию p21 (Cip1), p27 (Kip1) и p53. PHA-848125 добавляют к клеткам через 48 часов после TMZ, и рост клеток оценивают через 3 дополнительных дня культивирования. Комбинация лекарств TMZ, BG и PHA-848125 вызывает аддитивный или синергетический эффект на рост клеток, в зависимости от клеточной линии. В отсутствие BG комбинация все еще более активна, чем отдельные агенты в клеточных линиях, умеренно чувствительных к TMZ, но сравнима с одним PHA-848125 в двух TMZ-устойчивых клеточных линиях. Когда TMZ плюс BG используются в сочетании с PHA-848125 против культивируемых нормальных меланоцитов, не наблюдается ни синергетических, ни аддитивных антипролиферативных эффектов. В модели преклинического ксенотрансплантата A2780 карциномы яичника человека PHA-848125 показывает хорошую эффективность и хорошо переносится при повторных ежедневных обработках. Обработка мышей K-Ras (G12D) LA2 PHA-848125 (40 мг / кг два раза в день в течение 10 дней) приводит к значительному ингибированию роста опухоли в конце лечения и сопровождается снижением оборота клеточных мембран. С другой стороны, после перорального введения PHA-848125 проявляет значительную противоопухолевую активность в различных ксенотрансплантатах человека, опухолях, индуцированных канцерогеном, и в моделях диссеминированного первичного лейкоза; концентрации в плазме у грызунов находятся в том же диапазоне, что и концентрации, ингибирующие пролиферацию раковых клеток. Протокол (только для справки) Анализ киназы: [4]
|
Biochemical kinase inhibition assays
|
Inhibition of kinase activity by PHA-848125 is assessed using a strong anion exchanger (Dowex 1X8 resin)–based assay in robotized format run on 384-well plates. In this assay, specific peptides or protein substrates are transphosphorylated by their specific kinase in the presence of ATP traced with [γ-33P]ATP using optimal buffers and cofactors. The potency of PHA-848125 toward CDKs and 38 additional kinases belonging to an in-house Kinase Selectivity Screening panel is evaluated, and the relevant IC50s are determined. For each enzyme, the absolute KM values for ATP and the specific substrate are calculated and each assay is then run at optimized ATP (2KM) and substrate (5KM) concentrations. This setting enables direct comparison of IC50 values of PHA-848125 across the panel for evaluation of its biochemical profile.
|
Клеточный анализ: [1]
|
Cell lines
|
Melanoma cells
|
|
Concentrations
|
5.7 mg/mL
|
|
Incubation Time
|
2 hours
|
|
Method
|
Melanoma cells are suspended in culture media at a concentration of 2 × 104 cells/mL, dispensed in 50 μL aliquots into flat-bottom 96-well plates and allowed to adhere overnight at 37 °C. Graded amounts of PHA-848125 or TMZ are then added to the wells (4 wells per point) in 50 μL of CM and the plates are incubated at 37 °C in a 5% CO2 humidified atmosphere for 5 days. The cytotoxic effects of TMZ are also evaluated in combination with the MGMT inhibitor BG. To this end, 10 μM BG is added to the plates 2 hours before TMZ and left in culture for the entire period of cell exposure to the drug. ContS1017rol groups are represented by untreated cells and cells treated with BG or DMSO alone. The growth of the cells treated with BG or DMSO alone does not differ from that of untreated cells. MGMT activity of BG-treated cells is undetectable 2 hours after the addition of the inhibitor PHA-848125 and remained essentially undetectable up to the end of the assay. Normal melanocytes are suspended in MGM at the concentration of 1.6 × 105 cells/mL, plated (50 μL/well) and exposed to TMZ + BG or to PHA-848125 as described for melanoma cells. At the end of the incubation period, cell growth is evaluated by the MTT assay. Briefly, 0.1 mg of MTT (in 20 μL of PBS) is added to each well and cells are incubated at 37 °C for 4 hours. Cells are then lysed with a buffer (0.1 mL/well) containing 20% SDS and 50% N,N-dimethylformamide, pH 4.7. After overnight incubation, the absorbance is read at 595 nm using a 3550-UV microplate reader. Cell sensitivity to drug treatment is expressed in terms of IC50 (drug concentration producing 50% inhibition of cell growth, calculated on the regression line in which absorbance values at 595 nm are plotted against the logarithm of drug concentration).
|
Исследование на животных: [3]
|
Animal Models
|
K-Ras(G12D)LA2 mice
|
|
Formulation
|
5% dextrose solution
|
|
Dosages
|
40 mg/kg twice daily for 10 days
|
|
Administration
|
Oral administration
|
|
Solubility
|
30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W,
30 mg/mL
|
|
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
460.57
|
|
Formula
|
C25H32N8O
|
|
CAS No.
|
802539-81-7
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
92 mg/mL
(199.75 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
<1 mg/mL
(
|
|
In vivo
|
30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W
|
30 mg/mL
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
N,1,4,4-tetramethyl-8-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenylamino)-4,5-dihydro-1H-pyrazolo[4,3-h]quinazoline-3-carboxamide
|
Калькулятор молярности Калькулятор разведения Калькулятор молекулярной массы
Группа Продуктов : Клеточный цикл > CDK ингибитор
