.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 518,41 RAF265 (CHIR-265) является мощным селективным ингибитором C-Raf / B-Raf / B-Raf V600E с IC50 3-60 нМ и проявляет сильное ингибирование фосфорилирования VEGFR2 с EC50 30 нМ. Фаза 2. \ n Биологическая активность RAF265 ингибирует C-Raf, B-Raf дикого типа и мутантный (V600E) B-Raf. RAF265 эффективно блокирует фосфорилирование нижележащих субстратов Raf MEK и ERK в клетках, а также убивает клеточные линии меланомы и колоректального рака, несущие мутации B-Raf, независимо от статуса мутации PTEN. Ингибирование киназы Raf с помощью RAF265 в мутантных клеточных линиях меланомы B-Raf вызывает остановку клеточного цикла и индуцирует апоптоз, имитируя эффект Raf RNAi в этих клетках. RAF265 также сильно ингибирует фосфорилирование VEGFR2 и пролиферацию VEGF-стимулированного hMVEC. В клетках HT29 и MDAMB231 RAF265 проявляет ингибирующую активность с IC20 от 1 до 3 мкМ и IC50 от 5 до 10 мкМ, соответственно. В то время как RAF265 приводит к значительному снижению клоногенной выживаемости во всех протестированных клеточных линиях, это означает, что RAF265 индуцирует доминирующий эффект на клоногенную выживаемость. Добавление RAF265 к RAD001 в клетках HCT116 может привести к умеренному снижению фосфорилирования AKT, S6 и 4EBP1. Raf265 заметно снижает уровень белка Bcl-2 и оказывает сильное ингибирующее действие на клетки CM- и NCI-H727, не влияя при этом на TRAIL-чувствительность клеток BON1 и GOT1. Протеинкиназа D3 (PRKD3), которая при нокдауне может усиливать гибель клеток с помощью RAF265 в клетках меланомы A2058, которые предотвращают реактивацию передачи сигналов MAPK, индуцируют расщепление PARP, повышают активность каспазы, прерывают развитие клеточного цикла и ингибируют образование колоний. RAF265 показывает TVI% от 71% до 72% (процент ингибирования объема опухоли) в ксенотрансплантатах HCT116 при 12 мг / кг. В то время как комбинация RAF265 и RAD001 демонстрирует повышенную противоопухолевую активность с увеличенным T10 (время для достижения относительного объема опухоли в 10 раз превышающим исходный объем опухоли) и задержкой роста опухоли. Комбинация RAD001 и RAF265 также значительно усиливает активацию каспазы-3 в HCT116 и MDAMB231, но не в ксенотрансплантатах A549. RAF265 ингибирует накопление FDG (2-дезокси-2- [18F] фтор-d-глюкозы) и уменьшает объемы опухоли в ксенотрансплантатах A375M при пероральном введении дозы 100 мг / кг. Протокол (только для справки) Анализ киназы: [1]
|
Assay Protocol
|
Raf and Mek are combined at 2 × final concentrations in assay buffer (50 mM Tris, pH 7.5, 15 mM MgCl2. 0.1 mM EDTA and 1 mM DTT) and dispensed 15 μL per well in polypropylene assay plates. Background levels are determined in wells containing Mek and DMSO without Raf. To the Raf/Mek containing wells is added 3 μL of 10 × of RAF265 diluted in 100% DMSO. The raf kinase activity reaction is started by the addition of 12 μL per well of 2.5 × 33P-ATP diluted in assay buffer. After 45-60 minutes, the reactions are stopped with the addition of 70 μL of stop reagent (30 mM EDTA). Filtration plates are pre-wetted for 5 min with 70% ethanol, and then rinsed by filtration with wash buffer. Samples (90 μL) from the reaction wells are then transferred to the filtration plates. The filtration plates are washed 6 × with wash buffer using Millipore filtration apparatus. The plates are dried and 100 μL per well of scintillation fluid is added. The CPM is then determined using a Wallac Microbeta 1450 reader.
|
|
In Vitro Raf Screen
|
The activity of various isoforms of Raf serine/threonine kinases can be measured by providing ATP, MEK substrate, and assaying the transfer of phosphate moiety to the MEK residue. Recombinant isoforms of Raf are obtained by purification from sf9 insect ce
|
Клеточный анализ: [2]
|
Cell lines
|
Human A549 and H460 lung, HT29 and HCT 116 colon, and MDAMB231 breast cancer cell lines
|
|
Concentrations
|
0.1 - 10 μM
|
|
Incubation Time
|
48 hours
|
|
Method
|
The MTT assay and Bliss additivism model are used to assess the effect of RAF265 on cell viability. In each well of a 96-well plate, 1 × 104 cells are grown in 200 μL of medium. After 24 hours, RAF265 is added to achieve a final concentration of 0.1 to 10 μM. After 48 hours of treatment, 20 μL of 5 mg/mL MTT solution in PBS is added to each well. After 4 hours, supernatant is removed and formazan crystals are discarded in 200 μL of DMSO. Absorbance is then measured at 595 nm using an absorbance plate reader. Data are expressed as the percentage of viable cells.
|
Исследование на животных: [2]
|
Animal Models
|
A549, H460, HCT116, or MDAMB231 cells are injected s.c. into the flank region of 6-wk-old female athymic mice.
|
|
Formulation
|
Dissolved in polyethylene glycol-400 (PEG-400) to a concentration of 25 mg/mL. [5]
|
|
Dosages
|
12 mg/kg
|
|
Administration
|
Orally administered daily
|
|
Solubility
|
30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol,
30 mg/mL
|
|
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
518.41
|
|
Formula
|
C24H16F6N6O
|
|
CAS No.
|
927880-90-8
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
100 mg/mL
(192.89 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
33 mg/mL
(63.65 mM)
|
|
In vivo
|
30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol
|
30 mg/mL
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
1-methyl-5-(2-(5-(trifluoromethyl)-1H-imidazol-2-yl)pyridin-4-yloxy)-N-(4-(trifluoromethyl)phenyl)-1H-benzo[d]imidazol-2-amine
|
Калькулятор молярности Калькулятор разведения Калькулятор молекулярной массы
Группа Продуктов : MAPK > Раф ингибитор
