.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 412,48 BIX02188 - селективный ингибитор MEK5 с IC50 4,3 нМ, также ингибирует каталитическую активность ERK5 с IC50 810 нМ и не ингибирует близкородственные киназы MEK1, MEK2 , ERK2 и JNK2. \ N Биологическая активность BIX02188 значительно блокирует каталитическую активность MEK5 с IC50 4,3 нМ и ингибирует каталитическую активность ERK5 с IC50 0,83 мкМ. Он не проявляет активности против близкородственных киназ MEK1, MEK2, ERK1, p38α, JNK2, TGFβR1, EGFR и STK16 со значениями IC50 1,8 мкМ для TGFβR1, 3,9 мкМ для p38α и> 6,3 мкМ для других киназ. Предварительная обработка BIX02188 ингибирует индуцированное сорбитолом фосфорилирование ERK5 в клетках HeLa дозозависимым образом и не проявляет ингибирующей активности против фосфорилирования MAPK ERK1 / 2, p38 и JNK1 / 2. Обработка только BIX02188 в течение 24 часов в клетках HeLa или HEK293 не показывает какого-либо цитотоксического эффекта. BIX02188 ингибирует транскрипционную активацию MEF2C через сигнальный каскад MEK5 / ERK5 в активной системе экспрессии люциферазы, управляемой MEK5 / ERK5 / MEF2C, в клетках HeLa и HEK293 со значениями IC50 1,15 мкМ и 0,82 мкМ соответственно. BIX02188 также ингибирует фосфорилирование BMK1 в эндотелиальных клетках микрососудов легких крупного рогатого скота (BLMEC), которые стимулируются 300 мкМ H2O2 дозозависимым образом с IC50 0,8 мкМ, в частности, путем блокирования сигнального пути MEK5. BIX02188 полностью отменяет ингибирующий эффект на опосредование TNF; Активация JNK имела аналогичный эффект на ингибирование BMK1, предполагая, что она ингибирует передачу сигналов TNF через активацию пути передачи сигналов MEK5-BMK1. Протокол (только для справки) Анализ киназы: [1]
|
Catalytic assay
|
MEK5 protein isolated from a baculovirus expression system is used to measure kinase activity utilizing PKLight ATP Detection Reagent. The assay is performed using 15 nM GST-MEK5 and 0.75 μM ATP in assay buffer consisting of 25 mM Hepes, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 50 mM KCl, 0.2% BSA, 0.01% CHAPS, 100 μM Na3VO4, 0.5 mM DTT and 1% DMSO in the presence of varying concentrations of BIX02188. The kinase reaction mixture is incubated for 90 minutes at room temperature followed by addition of 10 μL of an ATP detection reagent for 15 minutes. The relative light unit (RLU) signal is measured and the RLU signals are converted to percent of control (POC) values for the determination of IC50 value.
|
Клеточный анализ: [1]
|
Cell lines
|
HeLa cells
|
|
Concentrations
|
Dissolved in DMSO, final concentration ~10 μM
|
|
Incubation Time
|
Pretreatment for 1.5 hours
|
|
Method
|
The cells are serum starved for 20 hours prior to stimulation with sorbitol at a final concentration of 0.4 M for 20 minutes at 37 °C. BIX02188 is added 1.5 hours prior to the addition of sorbitol. The cells are harvested and lysed in 50 μL RIPA buffer containing Halt protease and phosphate inhibitors at 4 °C for 5-10 minutes. The lysates are centrifuged for 10 minutes at 14,000 rpm and 50 μL lysate is added to 50 μl 2× sample buffer and boiled for 4 minutes at 95 °C. A 20 µl sample is run on SDS–PAGE 10% Tris-glycine gels and transferred to nitrocellulose. Western blotting is done with appropriate antibodies.
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
\ n Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
412.48
|
|
Formula
|
C25H24N4O2
|
|
CAS No.
|
1094614-84-2
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
43 mg/mL
(104.24 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
3 mg/mL
(7.27 mM)
|
|
In vivo
|
30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol
|
30 mg/mL
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
(Z)-3-((3-((dimethylamino)methyl)phenylamino)(phenyl)methylene)-2-oxoindoline-6-carboxamide
|
Калькулятор молярности Калькулятор разведения Калькулятор молекулярной массы
Группа Продуктов : MAPK > Ингибитор МЕК
