.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 517,06 Испинезиб (SB-715992, CK0238273) является мощным, специфическим и обратимым ингибитором белка веретена кинезина (KSP) с приложением Ki 1,7 нМ, без ингибирования CENP -E, RabK6, MCAK, MKLP1, KHC или Kif1A. Фаза 2. \ n Биологическая активность Испинезиб - это мощный, аллостерический, обратимый и специфический ингибитор KSP, который изменяет свойство связывания KSP с микротрубочками и нарушает их движение, ингибируя высвобождение АДФ без изменения высвобождения комплекса KSP-АДФ из микротрубочка. Испинезиб проявляет сильную цитотоксическую активность на панели линий опухолевых клеток, включая Colo205, Colo201, HT-29, M5076, Madison-109 и MX-1, с IC50 от 1,2 нМ до 9,5 нМ. В клетках рака предстательной железы PC-3 Испинезиб (15 нМ и 30 нМ) блокирует пролиферацию клеток и индуцирует апоптоз, регулируя уровни экспрессии генов, которые контролируют апоптоз, пролиферацию клеток, клеточный цикл и передачу сигналов клеток, таких как EGFR, p27, p15 , и Ил-11. На панели из 53 линий клеток молочной железы Испинезиб (7,4–600 нМ) демонстрирует широкую ингибирующую активность. В клетках BT-474 и MDA-MB-468 Испинезиб (150 нМ) индуцирует апоптоз, о чем свидетельствует более высокая доля апоптотических клеток, более низкий уровень антиапоптотических Bcl-XL и более высокие уровни проапоптотических Bax и Bid. Испинезиб (4,5–15 мг / кг) оказывает ингибирующее действие на клетки Colo205, Colo201, HT-29, но не на клетки MX-1, в моделях ксенотрансплантатов мышей. SB-715992 (6–10 мг / кг) также подавляет солидные опухоли мышей, включая карциному легкого Мэдисон 109, саркому M5076, а также лейкемии L1210 и P388. В моделях ксенотрансплантатов клеток рака молочной железы MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468 и KPL4 мышей испинезиб (8–10 мг / кг) подавляет рост опухоли. Протокол (только для справки) Анализ киназы: [1]
|
Steady-State Kinetic Analysis of Human KSP ATPase Activity and Inhibition by Ispinesib
|
Kinesin specificity analysis is carried out using a pyruvate kinase-lactate dehydrogenase detection system that couples the production of ADP to oxidation of NADH. Absorbance changes are monitored at 340 nm. Steady-state studies using nanomolar concentrations of KSP are performed using a sensitive fluorescence-based assay utilizing a pyruvate kinase, pyruvate oxidase, and horseradish peroxidase (HRP) coupled detection system that couples the generation of ADP to oxidation of Amplex Red to fluorescent resorufin. Generation of resorufin is monitored by fluorescence (λexcitation = 520 nm and λemission = 580 nm). Steady-state biochemical experiments are performed in PEM25 buffer [25 mM Pipes-K+ (pH 6.8), 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA] supplemented with 10 µM paclitaxel for experiments involving microtubules. The IC50 for steady-state inhibition is determined at 500 µM ATP, 5 µM Microtubules, and 1 nM KSP in PEM25 buffer. Ki app (apparent inhibitor dissociation constant) values of Ispinesib are extracted from the dose-response curves, with explicit correction for enzyme concentration by using the Morrison equation.
Inhibitor modality (e.g., competitive, noncompetitive, uncompetitive, or mixed) under steady-state conditions is determined by measuring the effect of inhibitor concentration on initial velocity as a function of substrate concentrations. Data are fit using equations in GraFit to velocity equations for the various modes of inhibition.
|
Клеточный анализ: [4]
|
Cell lines
|
Breast cancer cells, including MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468, and KPL4
|
|
Concentrations
|
0.085 nM–33 µM
|
|
Incubation Time
|
72 hours
|
|
Method
|
Cells are plated in log phase of growth in 96-well plates and treated with Ispinesib for 72 hours. Then, cell growth is measured using CellTiter-Glo, and luminescence is detected using BioTek FLx800. Data are analyzed and the IC50 value, defined as the drug concentration that results in 50% growth inhibition relative to control, is calculated.
|
Исследование на животных: [4]
|
Animal Models
|
Nude (nu/nu) mice models of MCF7, KPL4, and HCC1954 cells; severe combined immunodeficient (SCID) mice model of MDA-MB-468 cells;
|
|
Formulation
|
Dissolved in 10% ethanol, 10% cremophor, and 80% D5W (dextrose 5%)
|
|
Dosages
|
10 mg/kg for nude mice or 8 mg/kg for SCID mice
|
|
Administration
|
Intraperitoneal injection on a q4d× schedule (3 doses, every 4 day
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
517.06
|
|
Formula
|
C30H33ClN4O2
|
|
CAS No.
|
336113-53-2
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
CK0238273
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
103 mg/mL
(199.2 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
103 mg/mL
(199.2 mM)
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
(R)-N-(3-aminopropyl)-N-(1-(3-benzyl-7-chloro-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-methylpropyl)-4-methylbenzamide
|
Калькулятор молярности Калькулятор разведения Калькулятор молекулярной массы
Группа Продуктов : Цитоскелетная передача сигналов > Ингибитор кинезина
