МЛ324 1222800-79-4

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 349,43 ML324 является селективным ингибитором гистоновой деметилазы jumonji (JMJD2) с IC50 920 нМ. \ n Биологическая активность ML324 демонстрирует хорошую проницаемость для клеток Caco-2 и обладает превосходной микросомальной стабильностью в присутствии микросом печени мыши и крысы. ML324 демонстрирует сильную противовирусную активность против инфекции вируса простого герпеса (HSV) и цитомегаловируса человека (hCMV), подавляя экспрессию вирусного гена IE. В модели эксплантата ганглиев мышей латентно инфицированных мышей ML324 подавляет образование бляшек HSV и блокирует реактивацию HSV-1. Анализ AlphaScreen Ингибирование JMJD2E оценивают с помощью анализа AlphaScreen гистоновой деметилазы. В этом анализе используется биотинилированный пептидный субстрат и он основан на обнаружении метильной метки продукта с использованием специфического антитела, связанного с гранулами акцептора протеина А и гранулами донора стептавидина для захвата пептида. Анализ выполняется в формате 384-луночного планшета с использованием белых планшетов. Все стадии проводят в буфере для анализа (50 мМ HEPES pH 7,5, 0,1% (мас. / Об.) BSA и 0,01% (об. / Об.) Твин-20). FAS растворяют в свежем виде каждый день в 20 мМ HCl до концентрации 400 мМ и разбавляют до 1 мМ в деионизированной воде. Все остальные компоненты растворяют в свежем виде каждый день в деионизированной воде. Для определения IC50 4,9 мкл буфера для анализа, содержащего фермент JMJD2E (конечная концентрация 2 нМ), переносят в лунки 384-луночного проксипланта. Титры соединения (0,1 мкл) переносят в каждую лунку, и ферменту дают возможность предварительно инкубировать в течение 15 мин с соединением (конечная концентрация ДМСО составляет 1%). Ферментативная реакция инициируется добавлением 5 мкл субстратной смеси, состоящей из 2-OG (конечная концентрация 10 мкМ), FAS (конечная концентрация 1 мкМ), L-аскорбиновой кислоты (конечная концентрация 100 мкМ) и биотинилированного пептидного субстрата (30 мкМ). нМ конечная концентрация), и реакции дают возможность протекать в течение 20 мин при комнатной температуре. Ферментативную реакцию останавливают добавлением 5 мкл EDTA (конечная концентрация 7,5 мМ в буфере для анализа). Гранулы донора стрептавидина (0,08 мг / мл) и гранулы конъюгированного с белком-A акцептора (0,08 мг / мл) предварительно инкубируют в течение 1 часа с антителом против H3-K9Me2 (0,2 мкг / мл, Abcam). Присутствие биотин-H3-продукта определяют добавлением 5 мкл предварительно инкубированных гранул AlphaScreen (конечные концентрации 0,02 мг / мл по отношению к гранулам акцептора и донора). Детектированию дают возможность продолжаться в течение 1 часа при комнатной температуре, и аналитические планшеты считывают на планшет-ридере BMG Pherastar FS. Данные нормализованы к контролю без фермента, и IC50 определяется по аппроксимации кривой нелинейной регрессии с использованием GraphPad Prism 5.

Группа Продуктов : Эпигенетика > Ингибитор гистоновой деметилазы