Даклатасвир (BMS-790052) 1009119-64-5

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 738,88 Даклатасвир (BMS-790052) - высокоселективный ингибитор NS5A HCV с EC50 9-50 пМ, для широкого диапазона генотипов репликона HCV и JFH- 1 инфекционный вирус генотипа 2а в культуре клеток. Фаза 3. \ n \ n Биологическая активность BMS-790052 - один из самых мощных ингибиторов репликации HCV, о которых сообщалось до сих пор. Средние значения EC50 BMS-790052 составляют 50 и 9 пМ для репликонов HCV генотипа 1a и 1b соответственно. BMS-790052 имеет терапевтический индекс (CC50 / EC50) не менее 105 и неактивен по отношению к панели из 10 РНК и ДНК-вирусов с EC50 выше 10 мкМ. Это подтверждает специфичность BMS-790052 для HCV. В клетках Huh7, несущих репликоны генотипа 1b HCV, BMS-790052 блокирует как временную, так и стабильную репликацию генома HCV со значениями EC50 от 1 до 15 пМ. Было показано, что BMS-790052 (100 пМ или 1 нМ) изменяет субклеточную локализацию и биохимическое фракционирование NS5A. BMS-790052 ингибирует гибридные репликоны, содержащие гены NS5A генотипа 4 HCV с EC50 7-13 пМ. Остаток 30 NS5A является важным сайтом для BMS-790052-опосредованной устойчивости в гибридных репликонах. \ n Анализ FRET для ингибиторов NS5A HCV Пептид (Ac-Asp-Glu-Asp [EDANS] -Glu-Glu-Abu- [COO] Ala-Ser-Lys [DABCYL] -NH2) содержит донор флуоресценции {EDANS, 5 - [(2-аминоэтил) амино] нафталин-1-сульфоновая кислота} около одного конца пептида и акцептор {DABCYL, 4 - [(4-диметиламино) фенил] азо) бензойная кислота} около другого конца. Межмолекулярный резонансный перенос энергии между донором и акцептором гасит флуоресценцию пептида, но по мере того, как протеаза NS3 расщепляет пептид, продукты выделяются из тушения резонансного переноса энергии. Флуоресценция донора со временем увеличивается по мере того, как больше субстрата расщепляется протеазой NS3. Реагент для анализа представляет собой: реагент для лизиса культуры клеток люциферазы 5 ×, разбавленный до 1 × dH2O, NaCl (150 мМ), пептидом FRET (20 мкМ). Клетки HCV-Huh-7 помещают в 96-луночный планшет и оставляют для прикрепления в течение ночи (1 × 104 клеток на лунку). На следующий день в лунки добавляют BMS-790052 и планшет инкубируют в течение 72 часов. Затем планшет промывают PBS и используют для анализа FRET путем добавления 30 мкл реагента для анализа пептида FRET (описанного выше) на лунку. Сигналы получают с помощью прибора Cytofluor 4000, который был настроен на автоматический режим 340 нм (возбуждение) / 490 нм (эмиссия) на 20 циклов или меньше, при этом планшет считывается в кинетическом режиме. После FRET в каждую лунку добавляют 40 мкл субстрата люциферазы и измеряют люциферазу. \ n Метод BMS-790052 добавляют в 96-луночные планшеты, содержащие клетки репликона HCV, засеянные примерно за 12 часов до этого в 200 мкл среды. Клеточные планшеты проверяют на репликационную активность и цитотоксичность после 72 часов инкубации. Цитотоксичность измеряют с помощью CellTiter-Blue, после чего среду и краситель удаляют, планшеты переворачивают, а оставшуюся жидкость промокают бумажными полотенцами. Активность репликации клеточных линий генотипа 1a HCV количественно определяют с использованием люциферазы Renilla. В каждую лунку добавляют 1 × буфер для лизиса люциферазы Renilla (30 мкл) и планшеты инкубируют при осторожном встряхивании в течение 15 мин. Затем добавляется субстрат люциферазы Renilla (40 мкл) и сигналы детектируются с помощью люминометра Top Count, установленного для количественного определения эмиссии света. Стопроцентная активность рассчитывается для каждой клеточной линии для лунок, содержащих только ДМСО; процент активности рассчитывают для каждой концентрации ингибитора путем деления среднего значения для лунок, содержащих соединение, на среднее значение для лунок, содержащих ДМСО.

Группа Продуктов : Протеазы > Ингибитор протеазы ВГС