.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: 486,31 CHIR-98014 - мощный ингибитор GSK-3α / β с IC50 0,65 / 0,58 нМ, способный отличать GSK-3 от его ближайших гомологов Cdc2 и ERK2. \ n CHIR-98014 ингибирует человеческий GSK-3β с Ki 0,87 нМ. CHIR-98014 очень эффективен для предотвращения GSK-3 у мышей и крыс. Хотя CHIR-98014 действует как простой конкурентный ингибитор связывания АТФ, он демонстрирует от 500-кратной до> 1000-кратной селективности в отношении GSK-3 по сравнению с 20 другими протеинкиназами, включая Cdc2, ERK2, Tie-2 и KDR. CHIR-98014 предотвращает Cdc2 с IC50 3,7 мкМ. Однако CHIR 98014 обнаруживает сходную эффективность в отношении высокогомологичных ɑ- и β-изоформ GSK-3, примечательно, что он строго различает GSK-3 и его ближайшие гомологи CDC2 и ERK2. Воздействие ингибитора CHIR98014 на клетки CHO-IR или первичные гепатоциты крысы, экспрессирующие рецептор инсулина, приводит к двух- или трехкратной стимуляции отношения активности GS по сравнению с базовым. Концентрации CHIR-98014, вызывающие полумаксимальную стимуляцию GS (EC50), составляют 106 нМ и 107 нМ для гепатоцитов CHO-IR и крысы, соответственно. \ n Ингибитор GSK-3 CHIR-98014 активирует соотношение активности GS в изолированных скелетных мышцах I типа у чувствительных к инсулину худых крыс Zucker и у крыс ZDF, резистентных к инсулину. Солеусная мышца, выделенная от крыс ZDF, демонстрирует значительную резистентность к инсулину для активации GS, но реагирует на 500 нМ CHIR-98014 в той же степени (увеличение на 40%), что и мышца от худых крыс Zucker. Примечательно, что активация GS под действием инсулина плюс CHIR-98014 является дополнительной в мышцах у худых крыс Zucker и больше, чем в мышцах крыс ZDF. Общая активность GS не изменяется ни CHIR-98014, ни инсулином в этих клетках и мышцах. Между тем, CHIR-98014 не влияет на дозозависимость инсулина в мышцах худых животных. Снижение гипергликемии и улучшенное удаление глюкозы не ограничивается мышами db / db и крысами ZDF, поскольку аналогичные результаты наблюдаются у мышей ob / ob, мышей C57BL / 6 с индуцированным диетой диабетом и крыс SHHF с непереносимостью глюкозы, получавших CHIR- 98014. Кроме того, CHIR-98014 снижает фосфорилирование (Ser396) тау-белка в коре и гиппокампе постнатальных крыс. \ п
|
Kinase assays
|
Polypropylene 96-well plates are filled with 300 μL/well buffer (50 mM tris HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 1 mM dithiothreitol, 25 mM β-glycerophosphate, 1 mM NaF, 0.01% BSA, pH 7.5) containing kinase, peptide substrate, and any activators. CHIR-98014 or controls are added in 3.5 μL of DMSO, followed by 50 μL of ATP stock to yield a final concentration of 1 μM ATP in all cell-free assays. After incubation, triplicate 100-μL aliquots are transferred to Combiplate eight plates containing 100 μL/well 50 μM ATP and 20 mM EDTA. After 1 hour, the wells are rinsed five times with PBS, filled with 200 μL of scintillation fluid, sealed, left 30 min, and counted in a scintillation counter. All steps are performed at room temperature.
|
Клеточный анализ: [1]
|
Cell lines
|
CHO-IR cells
|
|
Concentrations
|
0.01-10 μM
|
|
Incubation Time
|
30 min
|
|
Method
|
CHO-IR cells expressing human insulin receptor are grown to 80% confluence in Hamm`s F12 medium with 10% fetal bovine serum and without hypoxanthine. Trypsinized cells are seeded in 6-well plates at 1 × 106 cells/well in 2 mL of medium without fetal bovine serum. After 24 hours, medium is replaced with 1 mL of serum-free medium containing GSK-3 inhibitor CHIR 98014 or control (final DMSO concentration 0.1%) for 30 min at 37 °C. Cells are lysed by freeze/thaw in 50 mM tris (pH 7.8) containing 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 100 mM NaF, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, and 25 μg/mL leupeptin (buffer A) and centrifuged 15 min at 4 °C/14000 g. The activity ratio of GS is calculated as the GS activity in the absence of glucose-6-phosphate divided by the activity in the presence of 5 mM glucose-6-phosphate.
|
Исследование на животных: [1]
|
Animal Models
|
db/db mice with 8-9 weeks
|
|
Formulation
|
15% Captisol/citrate vehicle
|
|
Dosages
|
30 mg/kg
|
|
Administration
|
Subcutaneously
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
\ n Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
486.31
|
|
Formula
|
C20H17Cl2N9O2
|
|
CAS No.
|
252935-94-7
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
4 mg/mL
(8.22 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
<1 mg/mL
(
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
N2-(2-(4-(2,4-dichlorophenyl)-5-(1H-imidazol-1-yl)pyrimidin-2-ylamino)ethyl)-5-nitropyridine-2,6-diamine
|
Калькулятор молярности Калькулятор разведения Калькулятор молекулярной массы
Группа Продуктов : PI3K / Akt / mTOR > Ингибитор ГСК-3
