NVP-BVU972 1185763-69-2

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 340,38 NVP-BVU972 - селективный и мощный ингибитор Met с IC50 14 нМ. \ n Биологическая активность NVP-BVU972 сильно ингибирует киназу MET, но проявляет низкое ингибирование в отношении других киназ включая наиболее близкую киназу RON со значениями IC50 более 1000 нМ. NVP-BVU972 также подавляет конститутивное фосфорилирование MET в клетках GTL-16 или стимулированное HGF фосфорилирование MET в клетках A549 со значениями IC50 7,3 нМ и 22 нМ, соответственно. NVP-BVU972 эффективно предотвращает рост клеточных линий GTL-16, MKN-45 и EBC-1, амплифицированных геном MET, со значениями IC50 66, 82 и 32 нМ, соответственно. В соответствии с их высокой частотой в скрининге NVP-BVU972, мутации Y1230 и D1228 вызывают резкие сдвиги в измеренных значениях IC50 для NVP-BVU972 в клеточной линии BaF3. Сопротивление, вызванное V1155L, более ограничено NVP-BVU972. Дозозависимое снижение фосфорилирования TPR-MET при нанесении NVP-BVU972 на клетки BaF3, экспрессирующие TPR-MET дикого типа. Обе мутации Y1230H и D1228A аннулировали действие NVP-BVU972, но не AMG 458. Однако F1200I и L1195V влияют на эффективность NVP-BVU972 по предотвращению фосфорилирования TPR-MET. Биохимический анализ TR-FRET с МЕТ дикого типа и мутантами Активность ферментов измеряется с помощью анализа резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET), выявляя фосфорилирование тирозина с помощью меченного Eu антифосфотирозинового антитела (донор флуоресценции) и аллофикоцианина. конъюгирован со стрептавидином (акцептор флуоресценции), который связывается с биотином на пептиде-субстрате. Для каждого варианта концентрации Km для АТФ определяют в отсутствие NVP-BVU972, а концентрацию АТФ в киназной реакции устанавливают на Km (4 мкМ для MET wt, 1 мкМ для MET Y1230H и MET F1200I). NVP-BVU972 растворяют, разводят в ДМСО и анализируют в четырех повторностях. Киназные реакции проводят в 50 мМ Трис-HCl pH 7,5, 8 мМ MgCl2, 4 мМ MnCl2, 0,05% Твин 20, 0,05% бычьего сывороточного альбумина, 0,1 мМ ЭДТА, 1 мМ DTT, 0,1 мМ Na3VO4 в белых 1536-луночных планшетах. при комнатной температуре. NVP-BVU972 и фермент инкубируют в объеме 2 мкл в течение 20 мин с последующим добавлением 1 мкл АТФ и 1 мкл биотинилированного пептидного субстрата (PTK1) до конечных концентраций Km и 1 мкМ, соответственно. Концентрации фермента в реакциях составляют 5 нМ для MET wt и 4 нМ для вариантов F1200I и Y1230H. Через 90 мин реакции останавливают добавлением 1 мкл раствора для остановки / обнаружения для достижения конечных концентраций 10 мМ ЭДТА, 3,5 нМ Eu-меченного антифосфотирозинового антитела PY20 и 10 нМ стрептавидина аллофикоцианина. Резонансный перенос энергии флуоресценции с временным разрешением измеряют в планшет-ридере Envision (возбуждение 320 нм, испускание 615 нм и 665 нм). Метод Клетки BaF3, содержащие TPR-MET или его различные мутанты, выращивают в среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки. Для поддержания родительских клеток BaF3 в среду дополнительно добавляют 10 нг / мл интерлейкина-3 (IL-3). Для анализов пролиферации клетки BaF3 высевают на 96-луночные планшеты в трех экземплярах по 104 клеток на лунку и инкубируют с различными концентрациями NVP-BVU972 в течение 72 часов с последующим количественным определением жизнеспособных клеток с использованием считывания восстановления красителя на натриевой соли резазурина. Значения IC50 определяются с помощью надстройки XLFit Excel с использованием 4-параметрической модели реакции на дозу.

Группа Продуктов : Протеин тирозинкиназа > Ингибитор c-Met