Гесперадин 422513-13-1

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 516,65 Гесперадин сильно подавляет сияние B с IC50 250 нМ. Он заметно снижает активность AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 и PHK, но не ингибирует активность MKK1 in vivo. \ N Биологическая активность Гесперадин подавляет способность иммунопреципитированного Aurora B фосфорилировать гистон H3 с IC50 250 нМ. и заметно снижает активность других киназ (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 и PHK) в концентрации 1 мкМ. Напротив, только 20-100 нМ гесперадина достаточно, чтобы вызвать потерю фосфорилирования митотического гистона H3-Ser10 в клетках HeLa. Лечение гесперадином вызывает дефекты митоза и цитокинеза, что приводит к остановке пролиферации клеток HeLa и полиплоидизации, что может быть определенно приписано ингибированию функции Aurora B в процессе прикрепления хромосом. Гесперадин (100 нМ) быстро преодолевает остановку митоза, вызванную таксолом или монастролом, но не нокодазолом. Обработка гесперадином и нокодазолом в клетках HeLa устраняет кинетохорную локализацию BubR1 и снижает интенсивность Bub1 на кинетохорах, предполагая, что функция Aurora B необходима для эффективного рекрутирования кинетохор BubR1 и Bub1, что, в свою очередь, может быть необходимо для длительной передачи сигналов контрольной точки. Гесперадин предотвращает фосфорилирование рекомбинантного трипаносомного гистона H3 киназой-1 T. brucei Aurora (TbAUK1) из патогенной трипаносомы brucei с IC50 40 нМ в анализах киназы in vitro. Гесперадин значительно подавляет рост клеток культивируемых инфекционных форм кровотока (BF) с IC50 48 нМ и лишь слабо подавляет рост клеток проциклических форм (PF) стадии насекомых с IC50 550 нМ. \ n Анализ киназы Aurora B Для анализа киназы Aurora B клетки HeLa лизируют в буфере, содержащем 50 мМ NaCl. Экстракт целых клеток центрифугировали при 13000 об / мин в течение 20 минут при 4 ° C. Осадок, полученный из 200 мг экстракта цельных клеток, снова экстрагируют в 15 мл буфера для лизиса, содержащего 250 мМ NaCl, чтобы получить активную киназу Aurora B из митотического хроматина. Низкоскоростной супернатант последнего экстракта используют для иммунопреципитации. Моноклональные мышиные анти-AIM-1 или мышиные анти-HA связывают с GammaBind Plus Sepharose, и шарики переворачивают через конец в экстракте в течение 90 минут при 4 ° C. Гранулы промывают, разделяют на аликвоты и промывают в киназном буфере (20 мМ Трис, pH 7,5, 150 мМ NaCl, 10 мМ MgCl2, 1 мМ DTT, 10 мМ NaF). Анализ киназы проводят с 10 мкл шариков в 20 мкл киназного буфера, содержащего 5 мкг гистона H3, 10 мкМ АТФ, 2,5 мкКи [γ-32P] АТФ и различные концентрации гесперадина в течение 20 минут при 37 ° C. Добавляют буфер для образцов SDS, образцы кипятят и разделяют с помощью SDS-PAGE. Гель сушат, и радиоактивный сигнал детектируется анализом PhosphorImager. Данные анализируются с помощью программного обеспечения ImageQuant. Метод Клетки подвергаются воздействию различных концентраций гесперадина в течение 24 и 48 часов. В указанные моменты времени фиксированные метанолом образцы клеток промывают PBS и затем окрашивают в буфере PI (50 мкг / мл йодида пропидия, 10 мМ Трис, pH 7,5, 5 мМ MgCl2, 200 мкг / мл РНКазы A) в течение 20-40 дней. минут при 37 ° C. Содержание ДНК определяется методом проточной цитометрии.

Группа Продуктов : Эпигенетика > Ингибитор аврора-киназы