.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: 488,74 PIK-75 является ингибитором p110α с IC50 5,8 нМ (в 200 раз сильнее, чем p110β), мутантами, специфичными для изоформ по Ser773, а также сильно ингибирует ДНК-PK. с IC50 2 нМ. \ n PIK-75 демонстрирует впечатляющую эффективность и селективность изоформ при p110α, в то время как соответствующие значения IC50 составляют 1300 нМ, 76 нМ и 510 нМ для других изоформ PI3K, p110β, -γ и -δ, соответственно. Кроме того, при связывании с очищенным p110α, PIK-75 является неконкурентным ингибитором по отношению к АТФ с Ki 36 нМ и конкурентным по отношению к PI субстрата с Ki 2,3 нМ. PIK-75 также демонстрирует сильное ингибирование ДНК-PK. PIK-75 (1 мкМ) снижает выживаемость клеток за счет значительного снижения митохондриальной активности в нестимулированных неастматических клетках гладких мышц дыхательных путей (ASM), астматических клетках ASM и фибробластах легких. В то время как в клетках ASM, стимулированных TGFβ, PIK75 снижает митохондриальную активность только в астматических клетках, не влияя на неастматические клетки. Недавнее исследование показывает, что PIK-75 (10 нМ) ингибирует TNF-α-индуцированную экспрессию мРНК CD38 и значительно ослабляет TNF-α-индуцированную активность ADP-рибозилциклазы в клетках гладких мышц дыхательных путей человека. \ n В модели опухоли ErbB3WT PIK-75 снижает хемотаксический ответ in vitro на HRGβ1 и снижает уровни pAkt на 40%. Кроме того, PIK-75 значительно снижает подвижность опухолевых клеток и инвазию in vivo в первичных опухолях ErbB3WT. [5] У самцов мышей CD1 PIK-75 приводит к серьезным нарушениям теста на толерантность к инсулину (ITT) и теста толерантности к глюкозе (GTT), а также к увеличению продукции глюкозы во время теста на толерантность к пирувату (PTT). Протокол (только для справки) Анализ киназы: [1]
|
Inhibition Assays
|
The PI3K inhibitor PIK-75 is dissolved at 10 mM in dimethyl sulfoxide and stored at −20°C until use. PI3K enzyme activity is determined in 50 μL of 20 mM HEPES, pH 7.5, and 5 mM MgCl2 containing 180 μM phosphatidyl inositol, with the reaction started by the addition of 100 μM ATP (containing 2.5 μCi of [γ-32P]ATP). After a 30-minute incubation at room temperature, the enzyme reaction is stopped by the addition of 50 μL of 1 M HCl. Phospholipids are then extracted with 100 μL of chloroform/methanol [1:1 (v/v)] and 250 μL of 2 M KCl followed by liquid scintillation counting. Inhibitors are diluted in 20% (v/v) dimethyl sulfoxide to generate a concentration versus inhibition of enzyme activity curve, which is then analyzed with the use of Prism version 5.00 for Windows to calculate the IC50. For kinetic analysis, a luminescent assay measuring ATP consumption is used. PI3K enzyme activity is determined in 50 μL of 20 mM HEPES, pH 7.5, and 5 mM MgCl2 with PI and ATP at various concentrations. After a 60-minute incubation at room temperature, the reaction is stopped by the addition of 50 μL of Kinase-Glo followed by a further 15-minute incubation. Luminescence is then read using a Fluostar plate reader. Results are analyzed using Prism.
|
Клеточный анализ: [3]
|
Cell lines
|
A2780, A2780/cp70, 2780AD, HCT116, HT29, WIL, CALU-3, MCF7, PC3 and HS852 cells
|
|
Concentrations
|
0-10 μM
|
|
Incubation Time
|
48 hours
|
|
Method
|
Mitochondrial activity is assessed after stimulation with TGFβ with or without inhibitors for 48 hours using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium (MTT) assay. Harvested washed cells are resuspended in DMEM-lO% FCS and aliquoted (500 μL) into 24-well cluster plates prior to serial dilution (1:2) in duplicates. To each well, 100 μL of an appropriate MTT concentration (dissolved in PBS and filtered through a 0.2 μm filter before use to remove any blue formazan product) is added immediately after diluting the cells, which are then incubated for 3.5 hours at 37 °C. The resulting blue formazan product is solubilized overnight (16 hours) at 37 °C by the addition of 500 μL of 10% sodium dodecyl sulfate (SDS) in 0.01 M HCl to each well. A sample (150 μL) from each duplicate well is transferred to a 96-well microplate, and the optical density determinedby automated spectrophotometry against a reagent blank (no cells). Absorbance is measured at a test wavelength of 570 nm and a reference wavelength of 690 nm. For each primary cell culture, results from three to six wells from each treatment are averaged, and data are expressed as absorbance 570 to 690 nm.
|
Исследование на животных: [5]
|
Animal Models
|
MTLn3 cells are injected into the right fourth mammary fat pad from the head of female severe-combined immunodeficient/NCr mice.
|
|
Formulation
|
PIK-75 is dissolved in DMSO and then diluted in PBS.
|
|
Dosages
|
≤1 μM
|
|
Administration
|
Administered via i.p.
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
\ n \ n Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
488.74
|
|
Formula
|
C16H14BrN5O4S.HCl
|
|
CAS No.
|
372196-77-5
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
3 mg/mL
(6.13 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
<1 mg/mL
(
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
(E)-N'-((6-bromoH-imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)methylene)-N,2-dimethyl-5-nitrobenzenesulfonohydrazide hydrochloride
|
Калькулятор молярности Калькулятор разведения Калькулятор молекулярной массы
Группа Продуктов : PI3K / Akt / mTOR > Ингибитор PI3K
