CP-673451

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: 417,5 CP-673451 - селективный ингибитор PDGFRα / β с IC50 10 нМ / 1 нМ, проявляет> 450-кратную селективность по сравнению с другими ангиогенными рецепторами, обладает антиангиогенной и противоопухолевой активностью. . \ n Биологическая активность CP 673451 является селективным ингибитором PDGFRα / β с IC50 10 нМ / 1 нМ, проявляет> 450-кратную селективность по сравнению с другими ангиогенными рецепторами. В опухолях глиобластомы CP-673451 (33 мг / кг) обеспечивает> 50% ингибирование рецептора PDGFR-β в течение 4 часов, что соответствует EC50 120 нг / мл в плазме при Cmax. В модели ангиогенеза губки CP-673451 ингибирует 70% стимулированного PDGF-BB ангиогенеза в дозе 3 мг / кг (qd × 5, перорально, что соответствует 5,5 нг / мл при Cmax). CP-673451 снижает скорость пролиферации клеток за счет механизмов, включающих снижение фосфорилирования GSK-3α и GSK-3β. Как в культурах RD, так и в RUCH2, CP-673451 ухудшает способность образовывать рабдосферу и дифференцировку клеток, вызывает повышенное старение. CP 673451 (стандартное введение перорально один раз в день) ингибирует рост опухоли (ED50 У мышей с ксенотрансплантатом RUCH2, CP 673451 снижает рост опухоли и инфильтрацию стромальных клеток. \ N Анализ ингибирования киназы Конструкция домена киназы, меченного глутатион-S-трансферазой внутриклеточной части PDGFR-β (аминокислоты 693-1401, номер доступа J03278) экспрессируется в клетках Sf-9 (система экспрессии бакуловируса). Кинетику фермента определяют путем инкубации фермента с возрастающими концентрациями АТФ в буфере фосфорилирования. [50 ммоль / л HEPES (pH 7,3), 125 ммоль / л NaCl, 24 ммоль / л MgCl2 в 96-луночных планшетах Nunc Immuno MaxiSorp, предварительно покрытых 100 мкл 100 мкг / мл поли-Glu-Tyr (соотношение 4: 1 ) разводят в PBS. \ n Через 10 минут планшеты промывают (PBS, 0,1% Tween 20), инкубируют с антителом против фосфотирозин-пероксидазы хрена и разводят в PBS, 0,05% Tween 20, 3% BSA в течение 30 минут. при комнатной температуре. Планшеты промывают, как указано выше, и инкубируют с 3,3 ', 5,5'-тетраметилбензом. Я обедаю. Реакцию останавливают, добавляя равный объем 0,09 NaH2SO4. Затем определяют количество фосфотирозин-зависимого сигнала на планшет-ридере при 450 нм. \ n Для рутинных ферментных анализов фермент инкубируют с 10 мкМ (конечный) АТФ в присутствии соединения, разведенного в ДМСО (1,6% об. / об. окончательный анализ ДМСО) в течение 30 минут при комнатной температуре в планшетах, как указано выше, предварительно покрытых с 100 мкл 6,25 мкг / мл поли-Glu-Tyr. Остальную часть анализа проводят, как указано выше, и значения IC50 рассчитывают как процент ингибирования контроля. Метод Были получены клетки PAE, стабильно экспрессирующие полноразмерные PDGFR и VEGFR. Для клеточных анализов селективности клетки PAE трансфицируют полноразмерным человеческим PDGFR-a, PDGFR-h или VEGFR-2. Клетки высевают из расчета 4 × 105 клеток / мл в 50 мкл ростовой среды (среда Ham's F-12 с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, по 50000 единиц каждого пенициллина и стрептомицина и 500 мкг / мл гентамицина) на лунку в 96-луночные планшеты. . Через 6-8 часов питательную среду заменяют 50 мкл обедненной сывороткой среды (как указано выше, но с 0,1% фетальной бычьей сывороткой) и клетки инкубируют в течение ночи. \ n Непосредственно перед добавлением соединения среду заменяли 95 мкл обедненной сывороткой средой. Соединения разводят в 100% ДМСО, добавляют к клеткам до конечной концентрации ДМСО 0,25% об. / Об. И инкубируют при 37 ° С в течение 10 минут. Клетки стимулируют подходящим лигандом и инкубируют, как указано выше, в течение дополнительных 8 минут. Среду удаляют и клетки промывают один раз PBS, затем лизируют 50 мкл буфера HNTG [20 ммоль / л HEPES (pH 7,5), 150 ммоль / л NaCl, 2% Triton X-100, 10% глицерин, 5 мкмоль / L EDTA, 2 ммоль / л NaVO4 и 1 таблетка полного ингибитора протеазы без EDTA на 25 мл] в течение 5 минут при комнатной температуре. \ n Затем лизаты разбавляют 50 мкл буфера HG [20 ммоль / л HEPES (pH 7,5), 10% глицерин]. Разбавленные лизаты клеток тщательно перемешивают, 50 мкл супернатанта переносят в планшет для захвата ELISA и инкубируют при комнатной температуре в течение 2 часов при перемешивании. Планшеты для захвата ELISA готовят путем покрытия 96-луночных планшетов ReactiBind с козьими антителами против кроликов 100 мкл / лунку 5 мкг / мл кроличьего анти-человеческого PDGFR-h, анти-PDGFR-a или анти-VEGFR-2 антител в течение 60-90 минут. \ n В конце 2-часовой инкубации планшеты промывают (PBS, 0,1% Tween 20) перед инкубацией с антителом против фосфотирозин-пероксидазы хрена (разведенным в PBS, 0,05% Tween 20) в течение 30 минут при комнатной температуре. Планшеты снова промывают, затем инкубируют с тетраметилбензидином и оценивают, как описано выше. Значения IC50 рассчитывают как процент ингибирования контроля.

Группа Продуктов : Протеин тирозинкиназа > Ингибитор PDGFR