Молекулярный вес: 266,29. Тирфостин AG 1296 является ингибитором PDGFR с IC50 0,3-0,5 мкМ, без активности по отношению к EGFR. \ N Биологическая активность AG 1296 селективно ингибирует киназу рецептора PDGF и зависимый от PDGF синтез ДНК в клетках Swiss 3T3 и у свиней. эндотеллярные клетки аорты с 50% ингибирующими концентрациями ниже 5 и 1 мкм соответственно. AG1296 ингибирует FGFR и c-Kit с IC50 12,3 мкМ и 1,8 мкМ в швейцарских клетках 3T3. AG1296 сильно ингибирует передачу сигналов человеческих рецепторов PDGF -α и -β, но не влияет на аутофосфорилирование VEGFR KDR или на синтез ДНК, индуцированный VEGF в эндотелиальных клетках аорты свиньи. \ n Обработка AG1296 обращает трансформированный фенотип sis-трансфицированных клеток NIH 3T3, но не влияет на src-трансформированные клетки NIH3T3. AG1296 - конкурентный ингибитор АТФ. AG1296 не мешает ни связыванию PDGF, ни димеризации рецептора PDGF, в то время как он отменяет аутофосфорилирование рецептора PDGF. Таким образом, AG1296 является чистым ингибитором каталитической активности рецепторной тирозинкиназы. Анализы мембранного аутофосфорилирования. Мембраны получают из конфлюэнтных культур клеток Swiss 3T3, как описано. Для измерения аутофосфорилирования рецептора 10 мкг мембранного белка на анализ инкубируют в течение 20 мин на льду в присутствии 1,2 мкг / мл EGF или 2 мкг / мл PDGF, или обоих; 50 мМ Hepes (pH 7,5); и 3 мМ MnCl2 в объеме 45 мкл. Чтобы проверить действие тирфостинов, их добавляют в объеме 0,5 мкл (в ДМСО; конечная концентрация 0,5%) за 15 мин до добавления факторов роста. \ n Фосфорилирование инициируется добавлением [γ-32P] АТФ и прекращается через 2 мин добавлением 10 мкл раствора, содержащего 6% SDS, 30% β-меркатоэтанол, 40% глицерин и 0,5 мг / мл бромфенолового синего. Образцы нагревают в течение 5 минут при 95 ℃ и подвергают SDS-PAGE с использованием 10% акриламидных гелей. Гели окрашивают, сушат и подвергают авторадиографическому анализу. Метод Клетки высевают в 24-луночные планшеты (5000 клеток / лунку) в DMEM / 10% FCS. На следующий день среду меняют на DMEM / 2% FcS с факторами роста или без них и добавляют тирфостины, как указано. Через три дня клетки подсчитывают на гемоцитометре. Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Группа Продуктов : Протеин тирозинкиназа > Ингибитор PDGFR
