.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 332,4 KW-2449 представляет собой ингибитор с множественной направленностью, в основном для Flt3 с IC50 6,6 нМ, умеренно активен в отношении FGFR1, Bcr-Abl и Aurora A; мало влияет на PDGFRβ, IGF-1R, EGFR. Фаза 1. \ n Биологическая активность KW-2449, мультикиназный ингибитор FLT3, ABL, ABL-T315I и киназы Aurora, изучается для лечения пациентов с лейкемией. KW-2449 демонстрирует мощное ингибирующее действие на лейкозные клетки с мутациями FLT3 за счет ингибирования киназы FLT3, что приводит к подавлению фосфорилированного FLT3 / STAT5, остановке G1 и апоптозу. Пероральное введение KW-2449 демонстрирует дозозависимое и значительное ингибирование роста опухоли на модели ксенотрансплантата с мутацией FLT3 с минимальным подавлением костного мозга. При лейкемии человека дикого типа FLT3 KW-2449 индуцирует уменьшение фосфорилированного гистона H3, остановку G2 / M и апоптоз. При лейкемии, устойчивой к иматинибу, KW-2449 способствует высвобождению устойчивости путем одновременного подавления киназ BCR / ABL и Aurora. На ингибирующую активность KW-2449 не влияет присутствие белка плазмы человека, такого как α1-кислотный гликопротеин. KW-2449 обладает мощной ингибирующей активностью против различных типов лейкемии за счет нескольких механизмов действия. KW-2449 обладает значительной активностью и требует клинических исследований у пациентов с лейкемией с мутациями FLT3, а также с мутациями, устойчивыми к иматинибу. Уровни фосфорилирования FLT3 и STAT5 снижаются KW-2449 дозозависимым образом. Кроме того, он сильно ингибирует ABL-T315I, который связан с резистентностью к IM, с IC50, равным 4 нМ. С другой стороны, KW-2449 мало влияет на PDGFRβ, IGF-1R, EGFR и различные серин / треониновые киназы даже в концентрации 1 мкМ. KW-2449 обладает мощной ингибирующей активностью не только в отношении лейкозных клеток, экспрессирующих FLT3 / ITD, но также лейкозных клеток, активированных FLT3 / KDM, и лейкозных клеток дикого типа, гиперэкспрессирующих FLT3. В соответствии с эффектом ингибирования роста KW-2449 подавляет фосфорилирование FLT3 (P-FLT3) и его нижележащую молекулу фосфо-STAT5 (P-STAT5) в клетках MOLM-13 дозозависимым образом. Кроме того, KW-2449 увеличивает процент клеток в фазе G1 клеточного цикла и взаимно снижает процент клеток в фазе S, что приводит к увеличению популяции апоптотических клеток. KW-2449 может дефосфорилировать конститутивно активную киназу WT-FLT3, но не ингибировать пролиферацию лейкозных клеток, если они в основном не зависимы от киназы FLT3. KW-2449 быстро всасывается и превращается в основной метаболит M1. Доклинические исследования показывают, что KW-2449 превращается моноаминоксидазой-B (MAO-B) и альдегидоксидазой в свой основной метаболит M1.KW-2449 опосредует цитотоксичность через ингибирование FLT3 / ITD.KW-2449 является прямым ингибитором FLT3 и индуцирует ингибирование его нижестоящей мишени STAT5. KW2449 синергетически взаимодействует с HDACI, вызывая апоптоз в клетках Ph + CML в зависимости от времени и концентрации. KW2449 синергетически увеличивает летальность вориностата / SNDX275 в клетках CML. Режимы KW-2449 активны против дополнительных IM-устойчивых лейкозных клеток Bcr / Abl +. KW2449 умеренно снижает фосфорилирование гистона H3, индикатора активности Aurora B, в обработанных нокодозолом клетках K562. В модели ксенотрансплантата опухоли MOLM-13 пероральное введение KW-2449 в течение 14 дней демонстрирует мощный и значительный противоопухолевый эффект в зависимости от дозы. Протокол (только для справки) Анализ киназы: [2]
|
FLT3 phosphorylation
|
Leukemia cells are washed in phosphate-buffered saline (PBS), then lysed by resuspending the cells in lysis buffer (20 mM Tris pH 7.4, 100 mM NaCl, 1% Igepal, 1 mM EDTA, 2 mM NaVO4, plus Complete protease inhibitor KW-2449 for 30 minutes while rocking. The extract is clarified by centrifugation at 1.6 × 104 g and the supernatant is assayed for protein (Bio-Rad). A 50-μg aliquot is removed as a whole-cell lysate for analysis of STAT5, and the remainder is used for immunoprecipitation with anti-FLT3. Anti-FLT3 antibody is added to the extract for overnight incubation, then protein A sepharose is added for 2 additional hours. Separate sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide electrophoresis (SDS-PAGE) gels for whole-cell lysate and immunoprecipates are run in parallel. After transfer to Immobilon membranes, immunoblotting is performed with antiphosphotyrosine antibody (4G10) to detect phosphorylated FLT3 or, for the whole-cell lysate gels, with a rat monoclonal antibody against phosphorylated STAT5 (residue Y694) then stripped and reprobed with anti-FLT3 antibody to measure total FLT3. Proteins are visualized using chemiluminescence, exposed on Kodak BioMax XAR film, developed, and scanned using a Bio-Rad GS800 densitometer. The concentration of KW-2449 for which the phosphorylation of FLT3 or STAT5 is inhibited to 50% of its baseline (IC50) is determined using linear regression analysis of the dose response curves. For direct analysis of FLT3 and STAT5 in circulating blasts, peripheral blood is collected in heparinized tubes and promptly chilled on ice. Samples are centrifuged for 10 minutes at 900 g, at 4 °C. The plasma is removed and stored frozen at −80 °C. The buffy coat is carefully transferred to ice-cold PBS, layered onto chilled Ficoll-Hypaque, and centrifuged for 5 minutes at 600 g, at 4 °C. All subsequent steps are carried out at 4 °C. Mononuclear cells are collected and washed rapidly once in red blood cell lysis buffer (0.155 M NH4Cl, 0.01 M KHCO3, 0.1 mM EDTA), then washed once in PBS. Cells are then lysed as described for FLT3 and STAT5 analysis.
|
Клеточный анализ: [1]
|
Cell lines
|
MOLM-13 and RS4;11 cells
|
|
Concentrations
|
33nM, 75nM, 0.1μM, 0.3μM and 0.15μM
|
|
Incubation Time
|
24, 48, and 72 hours
|
|
Method
|
Cell viability is determined by the sodium 3′-[1-(phenylaminocarbonyl)-3, 4-tetrazolium]-bis (4-methoxy-6-nitro) benzene sulfonic acid hydrate assay after incubation with or without KW-2449 for 72 hours at 37 °C. The number of viable cells is determined using the Cell Proliferation Kit II. For cell-cycle analysis, MOLM-13 and RS4;11 cells are treated with KW-2449. After 24, 48, and 72 hours of incubation at 37 °C, DNA contents are analyzed. Cell cycle distribution of K562, TCC-Y, and TCC/Ysr is analyzed 24 hours after treatment with KW-2449 or imatinib.
|
Исследование на животных: [3]
|
Animal Models
|
CBySmn.CB17-Prkdsscid/J (BALB/C) mice are injected with BV173/E255K/Luc cl4 cells.
|
|
Formulation
|
Dissolved in 0.5% methylcellulose 400 solution.
|
|
Dosages
|
32 mg/kg/day, 5 days/week
|
|
Administration
|
Orally (p.o.) administered
|
|
Solubility
|
0.5% methylcellulose,
30 mg/mL
|
|
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крысы 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
332.4
|
|
Formula
|
C20H20N4O
|
|
CAS No.
|
1000669-72-6
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
67 mg/mL
(201.56 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
67 mg/mL
(201.56 mM)
|
|
In vivo
|
0.5% methylcellulose
|
30 mg/mL
|
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
|
|
Chemical Name
|
(E)-(4-(2-(1H-indazol-3-yl)vinyl)phenyl)(piperazin-1-yl)methanone
|
Калькулятор молярности Калькулятор разведения Калькулятор молекулярной массы
Группа Продуктов : Ангиогенез > Ингибитор Src
