.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: 340,42 DBeQ - это селективный, мощный, обратимый и АТФ-конкурентный ингибитор p97 с IC50 1,5 мкМ. \ n DBeQ блокирует UbG76V-GFP, ODD-Luc и Luc-ODC деградация с IC50 2,6 мкМ, 56 мкМ и 45 мкМ в клетках HeLa. DBeQ как минимум в 50 раз менее активен в отношении N-этилмалеимид-чувствительного фактора (NSF) и протеасомы 26S. DBeQ ингибирует p97 конкурентно по отношению к АТФ с Ki 3,2 мкМ, что позволяет предположить, что он связывается с активным сайтом домена D2. DBeQ (10 мкМ) сильно блокирует деградацию TCRα-GFP в клетках HEK293. DBeQ индуцирует CHOP в течение 3 часов в зависимости от концентрации, но не увеличивает уровень p21 в клетках HEK293. DBeQ (15 мкМ) вызывает сильное накопление LC3-II в ядре, а также обогащенных мембранами и цитозольных фракций в клетках Hela. DBeQ действует, блокируя аутофагическую деградацию LC3-II вместо того, чтобы индуцировать аутофагию в клетках HeLa. DBeQ (10 мкМ) быстро способствует активации каспаз-3 и -7 [исполнителей »в клетках HeLa. DBeQ активирует внутренний апоптотический путь каспазы-9 в большей степени, чем внешний путь каспазы-8, тогда как STS активирует оба пути в одинаковой степени DBeQ в пять раз более активен против клеток множественной миеломы (RPMI8226), чем нормальные фибробласты легких плода человека (MRC5), при этом клетки HeLa и Hek293 демонстрируют промежуточную чувствительность. DBeQ демонстрирует 20-кратную селективность в отношении стабилизации p97-зависимых репортерных субстратов по сравнению с независимыми UPS репортерными субстратами в Клетки HeLa. DBeQ ухудшает деградацию субстратов в рамках пути ERAD и аутофагии. DBeQ (12 мкМ) ингибирует внутриклеточную нейтрализацию в зависимости от дозы в клетках HeLa. DBeQ (10 мкМ), который полностью ингибирует деградацию вируса и антител в судьбе капсидный эксперимент, не смог предотвратить деградацию Fc IgG. DBeQ (9 мкМ) снижает начальный градиент нейтрализации в зависимости от концентрации антител. DBeQ снижает как базальные и стимулируемое питательными веществами фосфорилирование мишеней MTOR аналогично эффектам рапамицина в клетках U20S. Быстро и мощно вызывает активацию каспаз палача и гибель клеток. Протокол (только для справки) Анализ киназы: [1]
|
Manual ATPase Assay
|
Assay Buffer [20 μL of 2.5× concentration, where 1× = 50 mM Tris (pH 7.4), 20 mM MgCl2, 1 mM EDTA, and 0.5 mM tris(2-carboxyethyl)phosphine (TCEP)] is dispensed into each well of a 96-well plate. Purified p97 (25 μL of 50 μM) is diluted in 975 μL of 1× Assay Buffer, and 10 μL is dispensed in each well. DBeQ (10 μL) or 5% DMSO (10 μL) is then added to each well, and the plate is incubated at room temperature for 10 min. The ATPase assay is carried out by adding to each well 10 μL of 500 μM ATP (pH 7.5), incubating at room temperature for 60 min, and then adding 50 μL Kinase Glo Plus reagent, followed by a final 10-min incubation at room temperature in the dark. Luminescence is read on an Analyst AD. DBeQ is assayed at a range of concentrations (0, 0.048, 0.24, 1.2, 6, and 30 μM) in triplicate.
|
Клеточный анализ: [1]
|
Cell lines
|
MRC-5, Hek293, HeLa and RPMI8226 cells
|
|
Concentrations
|
33 μM
|
|
Incubation Time
|
48 hours
|
|
Method
|
Cells are seeded on a 384-well solid white plate (5,000 cells/well). Cells are transfected with luciferase siRNA or p97 siRNA (10 nM) for 48 hours or treated with DBeQ for the indicated amount of time. Caspase-3/7 Glo, caspase-6 Glo, caspase-8 Glo, or caspase-9 Glo is added into each well and mixed by shaking at 500 rpm for 1 min. Luminescence signal is determined after incubation at room temperature for 1 hour. Cellular viability is determined with CellTiter-Glo reagen. To determine the IC50 of cellular viability, cells are treated with MG132 or DBeQ at seven concentrations (threefold serial dilutions starting at 33 μM) for 48 hours. IC50 values are calculated from fitting the percentage of luminescence signal normalized to DMSO treated cells).
|
Конверсия различных модельных животных на основе BSA (значение на основе данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Химическая информация
|
Molecular Weight (MW)
|
340.42
|
|
Formula
|
C22H20N4
|
|
CAS No.
|
177355-84-9
|
|
Storage
|
3 years -20℃Powder
|
|
6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
|
|
Synonyms
|
JRF 12
|
|
Solubility (25°C) *
|
In vitro
|
DMSO
|
68 mg/mL
(199.75 mM)
|
|
Water
|
<1 mg/mL
(
|
|
Ethanol
|
5 mg/mL
(14.68 mM)
|
|
|
Chemical Name
|
2,4-Quinazolinediamine, N2,N4-bis(phenylmethyl)-
|
Группа Продуктов : Убиквитин > p97 Ингибитор
