.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: 305,32 VU0357121 представляет собой новый положительный аллостерический модулятор (PAM) mGlu5 с EC50 33 нМ, неактивен или очень слабо противодействует другим подтипам рецепторов mGlu. \ n Биологическая активность VU0357121 do не связываются с аллостерическим сайтом MPEP mGlu5, поэтому не обладают активностью mGlu5 NAM. Мутация A809V / rmGlu5 ингибировала способность VU0357121 сдвигать кривую зависимости концентрации глутамата, тогда как ответ на VU0357121 не изменялся мутацией F585I / rmGlu5. VU0357121 демонстрируют более слабую кооперативность в анализе мобилизации Ca2 + в клеточной линии HEK293A-mGlu5 с низкой экспрессией. \ n Протокол (только для справки) Анализ киназы: [1]
|
Radioligand Binding Assay
|
The allosteric antagonist MPEP analogue [3H]methoxyPEPy is used to evaluate the ability of test compounds to interact with the MPEP site on mGlu5. Membranes are prepared from rat mGlu5 HEK293 cells. VU0357121 is diluted in assay buffer (50 mM Tris/0.9% NaCl, pH 7.4) to a 5× stock, and 100 μL of the test compound is added to each well of a 96 deep-well assay plate. Three hundred microliter aliquots of membranes diluted in assay buffer (20 μg/well) are added to each well. One hundred microliters of [3H]methoxyPEPy (2 nM final concentration) is added, and the reaction is incubated at room temperature for 1 h with shaking. After the incubation period, the membrane-bound ligand is separated from free ligand by filtration through glass-fiber 96-well filter plates. The contents of each well are transferred simultaneously to the filter plate and washed 3−4 times with assay buffer using a cell harvester. Forty microliters of scintillation fluid is added to each well and the membrane-bound radioactivity determine by scintillation counting. Nonspecific binding is estimated using 5 μM MPEP. Concentration−response curves are generated using a four parameter logistical equation in GraphPad Prism.
|
\ n Преобразование различных модельных животных на основе BSA (значение основано на данных из проекта рекомендаций FDA)
|
Species
|
Baboon
|
Dog
|
Monkey
|
Rabbit
|
Guinea pig
|
Rat
|
Hamster
|
Mouse
|
|
Weight (kg)
|
12
|
10
|
3
|
1.8
|
0.4
|
0.15
|
0.08
|
0.02
|
|
Body Surface Area (m2)
|
0.6
|
0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
|
0.007
|
|
Km factor
|
20
|
20
|
12
|
12
|
8
|
6
|
5
|
3
|
|
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
|
Animal B Km
|
|
Animal A Km
|
Например, чтобы изменить дозу ресвератрола, используемую для мыши (22,4 мг / кг), на дозу, основанную на BSA для крысы, умножьте 22,4 мг / кг на коэффициент Km для мыши, а затем разделите на коэффициент Km для крыса. Этот расчет дает эквивалентную дозу ресвератрола для крыс 11,2 мг / кг.
|
Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
|
mouse Km(3)
|
= 11.2 mg/kg
|
|
rat Km(6)
|
Группа Продуктов : Нейронная передача сигналов > Ингибитор GluR
