LY411575 209984-57-6

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 479,48 LY411575 - мощный ингибитор γ-секретазы с IC50 0,078 нМ / 0,082 нМ (на основе мембран / клеток), также ингибирует расщепление Notch с IC50 0,39 нМ. \ n \ n Биологическая активность LY-411575 ингибирует γ-секретазу, которую можно оценить с помощью таких субстратов, как белок-предшественник амилоида (APP) и расщепление Notch S3. LY-411575, который блокирует активацию Notch, приводит к апоптозу в первичных и иммортализованных клетках KS. Пероральная доза 10 мг / кг LY-411575 снижает Aβ40 и -42 в мозге и плазме в зависимости от дозы. LY-411575 снижает кортикальный Aβ40 у молодых трансгенных мышей CRND8 (до образования зубного налета) (ED50 ≈ 0,6 мг / кг) и вызывает значительную атрофию тимуса и гиперплазию бокаловидных клеток кишечника при более высоких дозах (> 3 мг / кг). Терапевтическое окно одинаково после перорального и подкожного введения, а также у молодых и старых мышей CRND8. Побочные эффекты тимуса и кишечника обратимы после 2-недельного периода вымывания. Трехнедельная обработка 1 мг / кг LY411575 снижает кортикальный Aβ40 на 69%, не вызывая кишечных эффектов, хотя наблюдается ранее не сообщаемое изменение цвета шерсти. \ n Анализы на Aβ и NICD. Процедуры для измерения активности γ-секретазы в мембранах, полученных из клеток HEK293, экспрессирующих АРР, были описаны ранее (Zhang L et al. Biochemistry 40, 5049-5055). Интактные клетки HEK293, экспрессирующие либо APP, либо NΔE, обрабатывают различными концентрациями LY-411,575 в течение 4 часов при 37 ° C. В случае клеток, экспрессирующих NΔE, клетки лизируют, лизаты клеток разделяют на 4-12% геле NuPAGE, и обработанный фрагмент NICD обнаруживают с помощью вестерн-блоттинга с помощью сайт-специфичного антитела для расщепления. Ингибирование продукции NICD количественно оценивается с помощью точечного денситометрического анализа с использованием FluorChem. В случае клеток, экспрессирующих АРР, кондиционированную среду собирают, центрифугируют при 10000 × g в течение 5 минут для удаления клеточного дебриса и хранят при -20 ° C до определения уровней Aβ. Aβ40 и -42, продуцируемые в анализах на основе мембран и клеток HEK293, а также Aβ40 в плазме и Aβ40 коры головного мозга мышей TgCRND8 анализируют без предварительной обработки с использованием иммуноанализа на основе электрохемилюминесценции. Aβ42 в плазме измеряют с помощью иммуноферментного анализа. Имеющийся в продаже набор для твердофазного иммуноферментного анализа используется для измерения Aβ42 коры головного мозга в соответствии с инструкциями производителя. \ n Метод Окрашивание ДНК / ИП выполняется с использованием стандартных методик. Вкратце, 1 × 106 клеток проницаемо 100% этанолом в присутствии 15% FBS. Клетки промывают и затем обрабатывают в течение 15 минут при 37 ° C 10 мг / мл РНКазы. Добавляют PI (5 мг / мл), и клетки инкубируют в течение 1 часа при 4 ° C перед анализом проточной цитометрией с анализом 10 000 клеток на одно закрытое определение. Результаты подтверждаются с помощью набора для окрашивания Immunotech Annexin V в соответствии с инструкциями производителя. По крайней мере, три независимых эксперимента показывают аналогичные результаты. \ п

Группа Продуктов : Протеазы > Ингибитор гамма-секретазы