NVP-BHG712 940310-85-0

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 503,48 NVP-BHG712 - специфический ингибитор EphB4 с ED50 25 нМ, который различает ингибирование VEGFR и EphB4; также проявляет активность против c-Raf, c-Src и c-Abl с IC50 0,395 мкМ, 1,266 мкМ и 1,667 мкМ соответственно. \ n Биологическая активность Обработка NVP-BHG712 также дозозависимо приводит к ингибированию аутофосфорилирования RTK в стабильных трансфицированных Клетки меланомы A375 с EC50 25 нМ и 4,2 мкМ для EphB4 и VEGFR2 соответственно. В модели ангиогенеза, индуцированного фактором роста, NVP-BHG712 (3 мг / кг, перорально) значительно подавляет образование ткани и васкуляризацию, стимулированное VEGF, путем ингибирования прямой передачи сигналов EphB4. Кроме того, NVP-BHG712 (10 мг / кг / кг, перорально) эффективно устраняет усиленное VEGF образование тканей и рост сосудов. NVP-BHG712 (3 мг / кг, перорально) демонстрирует длительное воздействие с концентрациями около 10 мкМ в плазме, а также в ткани легких и печени в течение до 8 часов, что приводит к длительному ингибированию активности киназы EphB4 в организме человека. мышей. \ n Анализы киназ in vitro Все анализы киназ in vitro выполняются с рекомбинантными очищенными киназами, приобретенными у внешних поставщиков или производимыми собственными силами. Для оценки киназной активности используются LanthaScreen TM на основе TR-FRET и сдвиг подвижности Caliper. Вкратце, технология анализа LanthaScreenTM основана на различении нефосфорилированного субстрата и фосфорилированного продукта с помощью фосфо-специфического антитела, связывающегося только с фосфорилированной версией субстрата. И антитело, и субстрат несут флуоресцентные метки, и непосредственная близость меток в сформированном комплексе позволяет измерять сигнал резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET). Считывание сигнала FRET в зависимости от времени / с синхронизацией по времени дополнительно улучшает эффективность анализа за счет снижения фоновой флуоресценции. Для измерения зависимости реакции от дозы NVP-BHG712 предварительно разводят в 90% ДМСО, и 50 нл растворов соединений распределяют непосредственно в пустой планшет для анализа с помощью нанодиспенсера HummingBird. Киназные реакции запускаются добавлением 4,5 мкл раствора АТФ (4 мкМ АТФ, 20 мМ Tris / HCL, 1 мМ DTT, 0,03% Tween20, 0,01 мМ Na3VO4) и 4,5 мкл смеси фермент / субстрат (100 нМ флуоресцеин поли-GAT). , 0,5% бычий сывороточный альбумин, 20 мМ Tris / HCL, 1 мМ DTT, 0,03% Tween20, 0,01 мМ Na3VO4). Другими компонентами смеси фермент / субстрат являются ферменты, а также MgCl2 / MnCl2, которые специально настроены в соответствии с требованиями отдельного фермента. После инкубации в течение 60 минут при комнатной температуре киназные реакции останавливают добавлением 4,5 мкл стоп-раствора (50 мМ ЭДТА, pH 8,0, 0,04% NP-40, 20 мМ Трис / HCl, pH 7,4) с последующим добавлением 4,5 мкл смеси для обнаружения (1,72 мкг / мл антитела Tb-PY20), 1% бычьего сывороточного альбумина, 20 мМ Tris / HCl, 1 мМ DTT, 0,03% Tween20, 0,01 мМ Na3VO4). После инкубации в течение 45 минут при комнатной температуре планшеты анализируют на планшет-ридере BMG PHERAstar. В тестах сдвига подвижности Caliper киназные реакции анализируются с помощью микрофлюидного капиллярного электрофореза. Перенос фосфата от АТФ к короткому пептиду киназой вызывает изменение суммарного заряда пептида на -2. Разность зарядов между нефосфорилированными и фосфорилированными частями пептида может быть разделена в электрическом поле. Использование пептидов, прикрепленных к флуоресцентной метке, позволяет обнаруживать и количественно определять обе формы и, следовательно, рассчитывать скорость реакции. Для измерения зависимости реакции от дозы NVP-BHG712 предварительно разводят в 90% ДМСО, и 50 нл раствора распределяют непосредственно в пустой планшет для анализа с помощью нанодиспенсера HummingBird. Киназные реакции запускаются добавлением 4,5 мкл субстратной смеси, состоящей из АТФ и пептидного субстрата в буфере для анализа (50 мМ HEPES pH 7,5, 0,02% бычий сывороточный альбумин, 1 мМ DTT, 0,02% Tween20, 0,01 мМ Na34, 10 мМ бета глицерофосфат) и 4,5 мкл раствора фермента в буфере для анализа. Концентрация пептида в анализах составляет 2 мкМ. Концентрации фермента, а также MgCl2 и MnCl2 специально подбираются в соответствии с требованиями конкретного фермента. Концентрации АТФ доводятся до значений Km конкретного фермента. После инкубации в течение 60 минут при 30 ° C киназные реакции останавливают добавлением 16 мкл стоп-раствора (100 мМ HEPES pH 7,5, 5% ДМСО, 0,1% покрывающий реагент, 10 мМ EDTA pH 8,0, 0,015% BRIJ35). Остановленные киназные реакции анализируются на ридере LC3000.

Группа Продуктов : Протеин тирозинкиназа > Ингибитор рецепторов эфрина