Голватиниб (E7050) 928037-13-2

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 633,69 Голватиниб (E7050) - двойной ингибитор c-Met и VEGFR-2 с IC50 14 нМ и 16 нМ, не ингибирует стимулированный bFGF рост HUVEC (вверх до 1000 нМ). Фаза 1/2. \ n Биологическая активность Исследования in vitro показывают, что E7050 сильно ингибирует фосфорилирование как c-Met, так и VEGFR-2. E7050 также сильно подавляет рост как опухолевых клеток, амплифицированных c-met, так и эндотелиальных клеток, стимулированных HGF или VEGF. E7050 обходит устойчивость ко всем обратимым, необратимым и мутантно-селективным EGFR-TKI, индуцированным экзогенным и / или эндогенным HGF в линиях мутантных EGFR клеток рака легких, путем блокирования пути Met / Gab1 / PI3K / Akt in vitro. E7050 также предотвращает появление устойчивых к гефитинибу клеток HCC827, вызванное постоянным воздействием HGF. Исследования in vivo с использованием E7050 показывают ингибирование фосфорилирования c-Met и VEGFR-2 в опухолях и сильное ингибирование роста опухоли и ангиогенеза опухоли в моделях ксенотрансплантатов. Обработка некоторых линий опухолей, содержащих амплификации c-met, высокими дозами E7050 (50–200 мг / кг) вызывает регрессию и исчезновение опухоли. В модели перитонеальной диссеминации E7050 демонстрирует противоопухолевый эффект против опухолей брюшины, а также значительное увеличение продолжительности жизни у обработанных мышей. В другом исследовании модели ксенотрансплантата опухоли, продуцируемые клетками Ма-1, трансфицированными HGF (Ма-1 / HGF), являются более ангиогенными, чем опухоли, контролируемые вектором, и проявляют устойчивость к ZD1839. Один только E7050 ингибирует ангиогенез и замедляет рост опухолей Ma-1 / HGF. E7050 в сочетании с ZD1839 вызывает заметную регрессию роста опухоли. \ n Вестерн-блот-анализ. Состояние фосфорилирования c-Met и VEGFR-2 определяется с помощью вестерн-блот-анализа. Для c-Met клетки MKN45 инкубируют с серийным разведением E7050 в полной среде при 37 ° C в течение 2 часов. Что касается VEGFR-2, HUVEC голодают с бессывороточной средой человека, не содержащей эндотелиальной сыворотки, содержащей 0,5% FBS, в течение 24 часов. Затем HUVEC инкубируют с серийным разведением E7050 в течение 1 часа, а затем инкубируют с 20 нг / мл человеческого VEGF в течение 5 минут. Клетки лизируют лизисным буфером (50 мМ HEPES [pH 7,4], 150 мМ NaCl, 10% глицерин, 1% Тритон X-100, 1,5 мМ MgCl2, 1 мМ ЭДТА [pH 8,0], 100 мМ NaF, 1 мМ фенилметилсульфонилфторид. 1 мМ ортованадат натрия, 10 мкг / мл апротинина, 50 мкг / мл лейпептина и 1 мкг / мл пепстатина A). Образцы резецированных опухолей гомогенизируют с буфером для лизиса, содержащим 25 мМ β-глицерофосфата и 0,5% (об. / Об.) Коктейль 2 ингибиторов фосфатазы при 4 ° C. Клеточный дебрис удаляют центрифугированием при 17 860 g в течение 20 минут при 4 ° C. Аликвоты супернатантов, содержащие 5-20 мкг белка, подвергают SDS-PAGE в восстанавливающих условиях. Затем белки переносятся на мембраны из ПВДФ, блокируются TBS, содержащим 0,05% твин-20 и либо 5% обезжиренного молока, либо 5% БСА. Мембраны зондируют следующими антителами: поликлональным антителом против c-Met (C-28) и поликлональным антителом против VEGFR-2 (C-20); мышиный антифосфотирозиновый клон 4G10; и поликлональное антитело против VEGFR-2, поликлональное антитело против фосфо-VEGFR-2 (Tyr996) и поликлональное антитело против фосфо-c-Met (Tyr1234 / 1235). Обнаружение выполняется с использованием набора для хемилюминесценции с усилением Super Signal. Иммунореактивные полосы визуализируются хемилюминесценцией с помощью системы обнаружения Image Master-VDS-CL. Интенсивность каждой полосы измеряется с помощью анализатора изображений. Метод Клетки (1–3 × 103 клеток / 100 мкл / лунка) высевают на 96-луночные культуральные планшеты с различными концентрациями E7050 и культивируют в течение 3 дней. Затем в каждую лунку добавляют 10 мкл реагента WST-8 и измеряют оптическую плотность при 450 нм по сравнению с эталонным измерением при 660 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов MTP-500. HUVEC (2 × 103 клеток / лунка) культивируют в течение 3 дней в среде, содержащей HGF (30 нг / мл), VEGF (20 нг / мл) или основной фактор роста фибробластов (bFGF) (20 нг / мл) вместе с серийно разбавленный E7050.

Группа Продуктов : Протеин тирозинкиназа > Ингибитор c-Met