OSI-930 728033-96-3

.cp_wz table {border-top: твердое тело 1px #ccc; border-left: твердое тело 1px #ccc; } .cp_wz таблица td {border-right: 1px solid #ccc; нижняя граница: сплошной 1px #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Молекулярный вес: \ n 443,44 OSI-930 - мощный ингибитор Kit, KDR и CSF-1R с IC50 80 нМ, 9 нМ и 15 нМ соответственно; также обладает высокой активностью в отношении Flt-1, c-Raf и Lck и имеет низкую активность в отношении PDGFRα / β, Flt-3 и Abl. Фаза 1. \ n Биологическая активность OSI-930 подавляет пролиферацию клеток в клеточной линии HMC-1 с IC50 14 нМ без значительного влияния на рост клеточной линии COLO-205, которая не экспрессирует конститутивно активную мутантную рецепторную тирозинкиназу. Более того, OSI-930 также индуцирует апоптоз в клеточной линии HMC-1 с EC50 34 нМ. Недавнее исследование показывает, что OSI-930 инактивирует очищенный рекомбинантный цитохром P450 (P450) 3A4 с Ki 24 мкМ в зависимости от времени и концентрации. OSI-930, вводимый в максимально эффективной дозе 200 мг / кг через желудочный зонд, проявляет сильную противоопухолевую активность в широком диапазоне доклинических моделей ксенотрансплантатов, включая модели ксенотрансплантатов HMC-1, NCI-SNU-5, COLO-205 и U251. Анализы протеинкиназ. Анализы протеинкиназ проводят на месте с помощью методов анализа на основе ELISA (Kit, KDR, PDGFRα и PDGFRβ) или радиометрическим методом. В собственных анализах ELISA использовали поли (Glu: Tyr) в качестве субстрата, связанного с поверхностью 96-луночных аналитических планшетов; фосфорилирование затем детектируют с использованием антифосфотирозинового антитела, конъюгированного с HRP. Затем связанное антитело количественно определяют с использованием ABTS в качестве субстрата пероксидазы путем измерения оптической плотности при 405/490 нм. Во всех анализах используются очищенные каталитические домены рекомбинантной киназы, которые экспрессируются либо в клетках насекомых, либо в бактериях. Набор и белок EGFR, используемые для внутренних анализов, получают внутри компании; другие ферменты получаются. Рекомбинантный белок Kit экспрессируется в виде слитого белка с NH2-концевой глутатион-S-трансферазой в клетках насекомых и первоначально очищается как нефосфорилированный (неактивированный) фермент с относительно высоким Km для АТФ (400 мкМ). В некоторых анализах активированную (фосфорилированную тирозином) форму фермента получают путем инкубации с 1 мМ АТФ в течение 1 часа при 30 ° C. Затем фосфорилированный белок пропускают через обессоливающую колонку для удаления большей части АТФ и хранят при -80 ° C в буфере, содержащем 50% глицерина. Полученный препарат имеет значительно более высокую удельную активность и более низкую Km для АТФ (25 мкМ), чем исходный нефосфорилированный препарат. Ингибирование автофосфорилирования Kit под действием OSI-930 оценивают путем инкубации нефосфорилированного фермента при 30 ° C в присутствии 200 мкМ АТФ и различных концентраций OSI-930. Реакцию останавливают путем удаления аликвот в буфер для образцов SDS-PAGE с последующим нагреванием до 100 ° C в течение 5 минут. Затем определяют степень фосфорилирования набора с помощью иммуноблоттинга как для всего набора, так и для фосфорилированного набора. \ n Метод. Для анализа пролиферации и апоптоза клетки высевают в 96-луночные планшеты и инкубируют в течение 2-3 дней в присутствии OSI-930 в различных концентрациях. Ингибирование роста клеток определяется люминесцентным количественным определением внутриклеточного содержания АТФ с помощью CellTiterGlo. Индукция каспазозависимого апоптоза OSI-930 количественно оценивается с помощью ферментативного анализа каспазы 3/7. Ингибирование ангиогенеза с помощью OSI-930 отслеживают с помощью анализа роста эндотелиального отростка кольца аорты крысы. Срезы аорты получают из самцов крыс, подвергнутых эвтаназии с помощью CO2, и культивируют in vitro в коллагеновой матрице в присутствии или в отсутствие OSI-930. Коллагеновый матрикс получают из коллагена крысиного хвоста 1 типа, солюбилизированного в 0,1% уксусной кислоте в концентрации 3 мг / мл, который объединяют с 0,125 объема коллагенового буфера (0,05 н. NaOH, 200 мМ HEPES, 260 мМ NaHCO3), 0,125 объема среды 199. , 0,0125 объема 1 М NaOH и 1% GlutaMax. Кольца аорты помещают в 0,4 мл этой матрицы в шестилуночные планшеты, к которым добавляют 0,5 мл эндотелиальной базальной среды и соответствующее количество OSI-930; кольца затем инкубируют в течение 10 дней, и полученный ангиогенный росток количественно оценивают по изображениям путем измерения площади, содержащей росток, в серии концентрических колец вокруг области ткани аорты.

Группа Продуктов : Протеин тирозинкиназа > Ингибитор c-Kit